DB65T 3597-2014 生鲜乳中布鲁氏菌PCR检测技术规程

摘要：本文件规定了生鲜乳中布鲁氏菌PCR检测的样品处理、DNA提取、PCR反应体系及条件、结果分析等内容。本文件适用于生鲜乳中布鲁氏菌的快速检测与鉴定。
Title：Technical Regulations for PCR Detection of Brucella in Raw Milk
中国标准分类号：B 46
国际标准分类号：67.120.30

DB65/T 3597-2014《生鲜乳中布鲁氏菌PCR检测技术规程》是一项新疆维吾尔自治区地方标准，旨在规范生鲜乳中布鲁氏菌的PCR检测操作流程。以下将从几个关键环节对标准的重要条文进行详细解读。

首先，在样本采集部分，标准明确规定了样品的来源和处理方式。要求采集的新鲜乳样应为直接从奶牛乳房挤出的初乳或常乳，并且要保证样品的新鲜度和代表性。同时，强调在采样过程中要避免外界污染，使用无菌容器盛装，并尽快送至实验室进行检测，以确保检测结果的准确性。

其次，在核酸提取环节，标准指出应采用适当的试剂盒或方法来提取DNA。建议选择高效的商业试剂盒，按照说明书进行操作，确保提取的核酸纯度和浓度满足后续PCR反应的需求。此外，还应注意防止交叉污染，特别是在不同样本间切换时，需更换手套和移液器吸头等耗材。

再者，关于PCR扩增条件设定，标准提供了详细的参数设置指导。包括初始变性温度、退火温度以及延伸时间等具体数值。例如，通常采用94℃作为初始变性温度，持续5分钟；之后进入循环阶段，每轮循环包括30秒的94℃变性，30秒的55℃退火，以及60秒的72℃延伸，共进行35个循环；最后以72℃延伸5分钟结束。这些条件的选择基于布鲁氏菌特异性引物的设计及实验验证结果，能够有效扩增目标基因片段。

最后，在结果分析与报告出具方面，标准强调必须由经过培训的专业人员完成。对于扩增产物的判断，可以通过凝胶电泳观察是否存在预期大小的目标条带来实现。如果出现清晰且符合预期大小的目标条带，则判定为阳性；反之则为阴性。同时，还需记录所有相关数据并形成正式报告，以便追溯整个检测过程。

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