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摘要:本文件规定了非洲猪瘟病毒检测的免核酸提取荧光PCR方法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品处理、检测步骤、结果分析和检测报告。本文件适用于非洲猪瘟病毒的快速检测。
Title:Detection of African Swine Fever Virus by Fluorescent PCR without Nucleic Acid Extraction
中国标准分类号:B46
国际标准分类号:67.040
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拓展解读
DB43/T 1670-2019《非洲猪瘟病毒检测 免核酸提取荧光PCR法》是一项湖南省地方标准,规定了利用免核酸提取技术结合荧光定量PCR方法快速检测非洲猪瘟病毒的操作流程和性能要求。以下是对该标准中一些关键条款的详细解读。
范围
本标准适用于使用免核酸提取荧光PCR法对非洲猪瘟病毒的检测。这一范围明确了该方法适用的对象是非洲猪瘟病毒,并且强调了免核酸提取技术的应用,这在实际操作中可以大大节省时间和成本。
规范性引用文件
标准中引用了GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法等相关文件。这些引用文件为确保检测结果的准确性和可靠性提供了基础保障。
术语和定义
- 免核酸提取:指无需传统意义上的核酸提取步骤即可直接用于后续扩增反应的技术。
- 荧光定量PCR:一种通过荧光信号监测DNA扩增过程来实时定量分析的方法。
技术要求
- 试剂盒选择:应选用经过验证能够有效检测非洲猪瘟病毒的试剂盒。
- 仪器设备:需配备符合要求的荧光定量PCR仪及相关耗材。
- 样品处理:对于不同类型的样本(如血液、组织等),有不同的前处理方法以保证样本质量。
检测程序
1. 样品准备:根据样本类型采取适当的采集与保存方式。
2. 反应体系构建:按照试剂说明书配置反应混合物。
3. 扩增及检测:将构建好的反应体系放入荧光定量PCR仪中进行扩增,并记录荧光强度变化曲线。
4. 结果判断:依据Ct值大小以及标准曲线来判定是否含有非洲猪瘟病毒。
性能指标
- 灵敏度:最低检出限应达到规定的数值。
- 特异性:与其他常见病原体无交叉反应。
- 重复性:同一实验条件下多次测试结果间差异应在允许范围内。
注意事项
- 实验人员需经过专业培训才能上岗操作。
- 定期维护保养仪器设备,确保其处于最佳工作状态。
- 妥善处置废弃物,避免环境污染。
以上就是对DB43/T 1670-2019《非洲猪瘟病毒检测 免核酸提取荧光PCR法》部分重要内容的深入解析。这项标准对于提高非洲猪瘟病毒检测效率具有重要意义,同时也为相关领域的研究人员提供了重要的参考依据。