DB53T 939-2019 家畜体细胞系建立与冷冻保存

《DB53/T 939-2019家畜体细胞系建立与冷冻保存》是一项云南省地方标准，旨在规范家畜体细胞的分离、培养、冻存及复苏操作流程。以下将对部分关键条款进行深入解读。

在样品采集环节，标准要求严格遵守无菌操作规程，使用75%酒精对采样部位进行消毒，并采用手术刀或剪刀切取组织块。组织样本需立即置于含有抗生素的培养基中，确保样本新鲜度。

关于细胞培养条件，标准规定培养箱温度应控制在37±1℃，二氧化碳浓度为5%，湿度维持在95%以上。初次培养时，建议接种密度为1×10^4至5×10^4个/cm²，以保证细胞贴壁生长效果。

对于冷冻保护剂的选择与使用，标准推荐采用两步法添加方式：先加入终浓度为5%-10%的二甲基亚砜（DMSO）或甘油，轻轻混匀后静置10分钟，再补充相同体积的冻存液完成配制。整个冷冻过程应在4℃预冷30分钟后转入-80℃冰箱过夜，最终转移至液氮长期储存。

复苏阶段则需快速将冻存管从液氮罐中取出并迅速投入37℃水浴中直至完全融化，随后将解冻后的细胞悬液缓慢滴加到预先准备好的培养基中，避免因温差过大导致细胞损伤。

此外，标准还强调了质量控制的重要性，包括定期检测细胞活力、染色体核型分析以及微生物污染筛查等措施，以确保细胞系的稳定性和可靠性。通过严格执行这些技术规范，可以有效提高家畜体细胞资源的保存质量和利用效率。