DB34T 2812-2017 水稻稻曲病菌 PCR 快速筛查法

摘要：本文件规定了水稻稻曲病菌PCR快速筛查法的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、DNA提取、PCR扩增、结果分析及注意事项。本文件适用于水稻稻曲病菌的快速检测和筛查。
Title：Rapid PCR Screening Method for Rice Head Blast Fungus
中国标准分类号：B 46
国际标准分类号：65.020.20

DB34/T 2812-2017《水稻稻曲病菌PCR快速筛查法》是一项安徽省地方标准，规定了利用聚合酶链式反应技术快速检测水稻稻曲病菌的方法。以下是对该标准中一些关键条文的详细解读。

### 标准适用范围

本标准适用于稻曲病菌感染的稻谷及其制品中稻曲病菌DNA的快速筛查。这意味着无论是在田间还是储藏环节，只要怀疑稻谷受到稻曲病菌污染，都可以采用此方法进行初步检测。

### 术语和定义

- **稻曲病菌**：即由Ustilaginoidea virens (Cooke) Tak. 引发的一种真菌病害，主要侵害水稻籽粒。

- **PCR**：聚合酶链式反应，一种用于扩增特定DNA片段的技术，是本标准的核心检测手段。

### 原理

标准指出，通过提取样本中的DNA，设计特异性引物对稻曲病菌的靶标基因进行扩增。如果样品中含有稻曲病菌，则扩增产物会在琼脂糖凝胶电泳后显现出预期大小的条带。这一过程确保了检测结果的高度特异性和灵敏度。

### 主要技术要求

#### 样品采集与处理

样品应从疑似感染区域随机抽取，并确保样品的新鲜度和代表性。对于稻谷样品，需去除杂质并研磨成粉末状以利于后续DNA提取。

#### DNA提取

使用适合真菌DNA提取的试剂盒或方法，按照说明书操作提取DNA。关键在于保证提取的DNA纯度高且浓度适中，这对于后续PCR反应至关重要。

#### PCR反应体系建立

PCR反应体系包括模板DNA、特异性引物、dNTPs、缓冲液以及热稳定DNA聚合酶等成分。标准推荐使用的引物序列需经过验证，能够准确识别稻曲病菌特有的遗传标记。

#### 扩增条件

通常设置95℃预变性3分钟，随后进行30轮循环（每轮包括94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸30秒），最后72℃延伸5分钟。这些参数需要根据实验设备和实际需求适当调整。

#### 结果判定

若在目标位置出现清晰可见的扩增条带，则判断为阳性；否则为阴性。同时，还应当设立阳性和阴性对照组来验证实验的有效性。

### 注意事项

1. 实验过程中应严格控制交叉污染，所有耗材都应一次性使用。

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