DB37T 3085-2017 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株和经典毒株的RT-PCR鉴别检测技术

摘要：本文件规定了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株和经典毒株的RT-PCR鉴别检测技术的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、检测步骤、结果分析及检测报告。本文件适用于高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株和经典毒株的鉴别检测。
Title：Technical Specification for RT-PCR Differential Detection of Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Strains and Classical Strains
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：65.020.30

DB37/T 3085-2017标准主要规定了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）株和经典毒株的RT-PCR鉴别检测方法。以下为该标准的重要条文及其详细解读：

### 样品采集与处理

标准要求样品应从疑似感染的猪只采集，包括血液、组织样本等。对于血液样本，需使用EDTA抗凝管收集；组织样本则需选取肺脏、淋巴结等病变部位。样本采集后应立即置于-70℃保存或尽快送检。这一要求确保了样本的新鲜度和完整性，从而提高检测结果的准确性。

### 实验试剂与仪器

标准中列出了所需的试剂和仪器，如反转录酶、DNA聚合酶、特异性引物及探针等。其中，引物和探针的设计至关重要，它们直接关系到检测的灵敏度和特异性。此外，还要求使用实时荧光定量PCR仪进行检测，这种仪器能够提供更精确的结果并减少人为误差。

### 检测步骤

首先进行RNA提取，然后通过反转录反应将RNA转化为cDNA。接下来设置PCR扩增体系，加入特异性引物和探针后开始扩增反应。标准特别强调了反应条件的选择，如退火温度、延伸时间等，这些参数直接影响检测效果。

### 结果判定

根据Ct值来判断检测结果。若Ct值小于设定阈值，则认为样本呈阳性；反之则为阴性。同时，还需设立阳性对照和阴性对照以验证实验的有效性。此部分明确了如何准确解读实验数据，避免误判。

### 注意事项

在操作过程中需要注意实验室环境的清洁卫生，防止交叉污染。所有使用的耗材都必须是无核酸酶的，并且在整个操作流程中要严格遵守无菌操作规程。此外，实验人员应接受专业培训，熟悉整个检测过程，确保操作规范。

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