DB37T 3085-2017 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株和经典毒株的RT-PCR鉴别检测技术

DB37/T 3085-2017标准主要规定了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）株和经典毒株的RT-PCR鉴别检测方法。以下为该标准的重要条文及其详细解读：

样品采集与处理

标准要求样品应从疑似感染的猪只采集，包括血液、组织样本等。对于血液样本，需使用EDTA抗凝管收集；组织样本则需选取肺脏、淋巴结等病变部位。样本采集后应立即置于-70℃保存或尽快送检。这一要求确保了样本的新鲜度和完整性，从而提高检测结果的准确性。

实验试剂与仪器

标准中列出了所需的试剂和仪器，如反转录酶、DNA聚合酶、特异性引物及探针等。其中，引物和探针的设计至关重要，它们直接关系到检测的灵敏度和特异性。此外，还要求使用实时荧光定量PCR仪进行检测，这种仪器能够提供更精确的结果并减少人为误差。

检测步骤

首先进行RNA提取，然后通过反转录反应将RNA转化为cDNA。接下来设置PCR扩增体系，加入特异性引物和探针后开始扩增反应。标准特别强调了反应条件的选择，如退火温度、延伸时间等，这些参数直接影响检测效果。

结果判定

根据Ct值来判断检测结果。若Ct值小于设定阈值，则认为样本呈阳性；反之则为阴性。同时，还需设立阳性对照和阴性对照以验证实验的有效性。此部分明确了如何准确解读实验数据，避免误判。

注意事项

在操作过程中需要注意实验室环境的清洁卫生，防止交叉污染。所有使用的耗材都必须是无核酸酶的，并且在整个操作流程中要严格遵守无菌操作规程。此外，实验人员应接受专业培训，熟悉整个检测过程，确保操作规范。

以上是对DB37/T 3085-2017标准中关键内容的深入解析，希望对从事相关工作的人员有所帮助。