DB37T 3005-2017 猪流行性腹泻病毒分离与RT-PCR检测技术

摘要：本文件规定了猪流行性腹泻病毒的分离方法和RT-PCR检测技术的操作步骤、结果判定及注意事项。本文件适用于猪流行性腹泻病毒的实验室检测与诊断。
Title：Swine Epidemic Diarrhea Virus Isolation and RT-PCR Detection Technology
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：65.020.30

《DB37/T 3005-2017猪流行性腹泻病毒分离与RT-PCR检测技术》是一项山东省地方标准，主要用于指导猪流行性腹泻病毒的分离与检测工作。这项标准在保障生猪健康、防止疾病传播方面具有重要意义。以下将选取部分关键条款进行详细解读。

### 样品采集

标准中明确指出样品应从发病早期的病猪采集，包括粪便、肠内容物和小肠组织等。对于粪便样本，要求使用无菌容器收集新鲜排泄物；而对于肠内容物，则需无菌操作取出空肠或回肠内容物。这些措施能够确保样本的新鲜度和代表性，从而提高后续检测结果的准确性。

### 病毒分离

在病毒分离环节，标准规定了细胞培养的具体条件。首先，选用Vero细胞作为宿主细胞进行培养，因为这种细胞对猪流行性腹泻病毒敏感。其次，在接种病毒前，需要对细胞进行预处理，确保其处于适宜的状态以接受病毒感染。此外，还强调了维持培养环境的温度（通常为37℃）和湿度，以及定期更换培养基的重要性，这些都是保证病毒成功分离的关键因素。

### RT-PCR检测

关于RT-PCR检测部分，标准提供了详细的实验流程。其中包括RNA提取步骤，要求采用高效稳定的试剂盒来完成这一过程；随后是逆转录反应，通过特定引物将RNA转化为cDNA；最后是扩增阶段，利用特异性引物进行扩增，并通过电泳分析产物长度来判断是否存在目标基因片段。整个过程中需要注意控制反应体系内的各种参数如温度梯度设置、循环次数等，以获得最理想的检测效果。

### 结果判定

当进行结果判定时，若扩增曲线出现明显阳性信号，则可初步认定样品中含有猪流行性腹泻病毒核酸。但是为了排除假阳性的可能性，还需要进一步做重复试验或者采用其他方法验证。只有经过多次独立测试均显示阳性结果后，才能最终确定该样品携带该病原体。

登陆阅读剩余内容

登陆 注册