DB34T 3307-2018 分子标记辅助选择抗稻瘟病基因Pi1、Pi2的检测 PCR法

DB34/T 3307-2018标准规定了利用PCR技术检测水稻中与抗稻瘟病相关的Pi1和Pi2基因的方法。以下是对该标准中几个关键条款的详细解读：

1. 适用范围：本标准适用于通过分子标记辅助选择技术对水稻品种或育种材料中Pi1和Pi2基因的存在与否进行检测。这表明该方法主要服务于水稻育种工作，帮助筛选具有抗稻瘟病特性的种质资源。

2. 术语和定义：

- Pi1基因：编码一种能够识别特定稻瘟病菌效应蛋白的受体蛋白，赋予水稻对该病害的部分抗性。

- Pi2基因：类似于Pi1基因，也参与稻瘟病抗性的形成，但其作用机制可能略有不同。

3. 试剂与设备：标准中列出了所需的所有试剂及设备清单，包括DNA提取试剂盒、特异性引物、PCR扩增仪等。这些工具的选择直接影响到检测结果的准确性。

4. 样品采集与处理：要求从待测植株的新鲜叶片中提取高质量的总DNA作为模板。样本质量的好坏直接决定了后续实验的成功率。

5. PCR反应体系建立：给出了具体的反应条件设置，如退火温度、延伸时间等参数。这些参数经过优化后可以提高特异性和灵敏度。

6. 结果分析：

- 电泳检测：使用琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物，并观察是否有预期大小的目的条带出现。

- 阳性对照：采用已知携带Pi1/Pi2基因的水稻品种作为对照组，确保实验的有效性。

- 阴性对照：选用不含目标基因的品种或者水样作为参照，排除非特异性扩增的可能性。

7. 报告撰写：最后需要根据实验所得的数据来编写详细的检测报告，内容至少应包含样品信息、所用方法、实验过程、结果描述以及结论部分。

通过遵循上述步骤，研究人员能够有效地评估某一水稻品种是否具备Pi1和/或Pi2基因，从而为培育更加耐病的新品种提供科学依据。