DB22T 3035-2019 普通级实验用猫杯状病毒抗体检测 ELISA法

DB22/T 3035-2019《普通级实验用猫杯状病毒抗体检测 ELISA法》是一项吉林省地方标准，主要用于规范实验用猫的杯状病毒抗体检测方法。以下将从几个关键部分对标准进行详细解读。

一、适用范围

该标准适用于普通级实验用猫杯状病毒抗体的ELISA检测。明确指出本标准适用于普通级实验动物，而非无特定病原体（SPF）级别或其他更高标准的实验动物。

二、术语和定义

1. 杯状病毒：一种感染猫科动物的RNA病毒，可引起上呼吸道感染等症状。

2. 抗体：机体免疫系统针对特定抗原产生的特异性蛋白质。

3. ELISA：酶联免疫吸附测定法，是一种常用的免疫学检测技术。

三、试剂与材料

标准要求使用符合国家相关规定的试剂盒，并且需要确保试剂的有效期和储存条件符合说明书要求。同时强调了实验用水应为去离子水或蒸馏水。

四、仪器设备

包括但不限于微量移液器、洗板机、酶标仪等设备，这些设备需定期校准以保证检测结果准确可靠。

五、样品采集与处理

样品应从健康状况良好的实验猫中采集血清样本，采样时要注意无菌操作避免污染。样本采集后需尽快送检，在4℃条件下保存不得超过6小时，如不能及时检测则需冷冻保存。

六、检测步骤

1. 样品稀释：按照试剂盒说明书要求对样本进行适当倍数稀释。

2. 加样：将处理好的样本加入到预先包被有相应抗原的微孔板中。

3. 孵育：在设定温度下孵育一定时间，使抗原抗体充分结合。

4. 洗涤：采用专用洗涤液多次清洗去除未结合物质。

5. 显色反应：加入底物溶液引发颜色变化。

6. 终止反应：加入终止液停止显色反应。

7. 测读吸光度值：使用酶标仪测量各孔的吸光度值。

七、结果判断

根据试剂盒提供的临界值来判定样本是否阳性。如果测得的吸光度值大于等于临界值，则认为该样本为阳性；反之则为阴性。此外还建议设立阳性对照和阴性对照以验证实验的有效性。

八、质量控制

为了确保检测结果的准确性，标准特别强调了质控措施的重要性。例如，每次试验都必须包含空白对照、阳性对照以及阴性对照，并且所有数据均需记录完整以便追溯。

九、注意事项

1. 实验人员必须经过专业培训并持证上岗；

2. 所有操作均应在洁净环境中进行防止交叉污染；

3. 定期检查仪器设备的工作状态确保其正常运行；

4. 若发现异常情况应及时查找原因直至问题解决。

通过以上内容可以看出，《普通级实验用猫杯状病毒抗体检测 ELISA法》不仅规定了具体的检测流程和技术细节，而且涵盖了从样本采集到最终报告出具全过程的质量管理体系框架。这对于提高实验用猫健康管理水平具有重要意义。