DB32T 3487-2018 黄瓜绿斑驳花叶病毒苗期检测技术规程

DB32/T 3487-2018《黄瓜绿斑驳花叶病毒苗期检测技术规程》是一项江苏省地方标准，为黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）的苗期检测提供了规范化的操作流程和技术要求。以下是对该标准中一些关键条款的详细解读：

1. 适用范围

本标准适用于黄瓜绿斑驳花叶病毒在黄瓜等植物幼苗上的检测工作。明确了标准的应用领域，确保检测活动有明确的目标和对象。

2. 术语和定义

- 黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）：一种能够感染多种葫芦科植物的病毒，引起叶片出现黄绿相间的斑驳症状。

- PCR检测：通过聚合酶链式反应扩增特定DNA片段以鉴定病毒的存在。

这些定义为后续的技术操作提供了基础概念支持，保证了行业内对术语的一致理解。

3. 样品采集与处理

- 样品应从疑似感染植株上选取新生叶片作为检测材料。

- 在采样过程中需注意避免污染，并记录采样日期、地点及植株状况等信息。

- 样品采集后应及时送至实验室进行处理，若不能立即检测，则需将样品置于低温条件下保存。

4. 核酸提取

使用商业化试剂盒按照说明书进行操作，确保提取出高质量的RNA样本用于后续实验。强调了核酸质量对于检测结果准确性的重要性。

5. RT-PCR检测方法

- 设计特异性引物以扩增目标基因序列。

- RT-PCR反应体系包括逆转录酶、DNA聚合酶、缓冲液、dNTPs以及模板RNA。

- 扩增程序设定为：42℃反转录30分钟；94℃预变性5分钟；然后94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸60秒，共35个循环；最后72℃延伸10分钟。

- 检测结果判断依据扩增曲线或电泳图谱中是否出现预期大小的目的条带。

6. 阳性对照与阴性对照设置

每次试验都必须设立阳性对照（已知含有CGMMV的样本）和阴性对照（不含任何病毒的健康样本），以此来验证试剂的有效性和操作过程中的无污染情况。

7. 结果判定

若扩增产物符合预期条件即可判定为阳性；反之则为阴性。同时需结合田间观察到的症状综合分析。

8. 报告撰写

检测完成后需出具正式报告，内容涵盖样品基本信息、检测方法、结果描述及结论等部分，并由授权签字人签字确认。

以上是对DB32/T 3487-2018标准中若干重要条款的深入解析，希望对你有所帮助！