DB22T 2692-2017 饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌检测 双重微滴数字PCR法

DB22/T 2692-2017是吉林省地方标准，规定了饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌检测的双重微滴数字PCR方法。以下为标准的重要条文解读：

标准适用于饲料原料及成品中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的定量检测。

试剂盒应包含阳性对照、阴性对照和微滴生成油。实验前需确认试剂盒在有效期内且无污染。

样本处理要求称取25克样品加入225毫升无菌生理盐水中，充分振荡混匀制成1:10稀释液。若检测结果为阳性，则需进一步制备10倍系列稀释液。

仪器参数设置：微滴生成频率为30Hz，样本体积为20微升，微滴生成油体积为40微升。微滴生成后应立即进行PCR扩增。

金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的特异性引物与探针需分别设计并验证其特异性和灵敏度。阳性判断值设定为1000拷贝/克。

实验过程应严格控制交叉污染，每个反应体系内均需包含空白对照和阳性对照。结果判定时，空白对照Ct值应大于38或无Ct值，阳性对照Ct值应在设定范围内。

该标准通过建立双重微滴数字PCR检测方法，实现了对饲料中两种病原菌的同时快速检测，具有高灵敏度和特异性，为饲料质量安全提供了技术支持。