DB22T 2079-2014 皮革中动物源性成分检测 实时荧光PCR法

摘要：本文件规定了皮革中动物源性成分的实时荧光PCR检测方法，包括样品处理、DNA提取、扩增反应及结果判定。本文件适用于牛、羊、猪等常见动物源性成分的鉴别检测。
Title：Detection of Animal-derived Components in Leather - Real-time Fluorescent PCR Method
中国标准分类号：X43
国际标准分类号：07.100.30

DB22/T 2079-2014《皮革中动物源性成分检测 实时荧光PCR法》是一项专门用于检测皮革制品中是否含有动物源性成分的技术规范。这项标准适用于各类皮革制品，包括但不限于服装革、鞋面革、手套革等。通过实时荧光PCR技术，可以有效检测出皮革中可能存在的动物DNA残留，这对于确保产品符合相关法规要求具有重要意义。

### 关键条文解读

#### 1. 样品采集与处理

标准指出，在采集样品时应遵循无菌操作原则，避免污染。样品需从皮革的不同部位随机抽取至少两份，每份重量不低于5克。样品处理过程中，首先使用剪刀将皮革剪成小块，然后用研磨机将其研磨成粉末状。处理后的样品需立即置于密封袋内，并尽快送至实验室进行检测。

#### 2. DNA提取

DNA提取是整个检测流程的关键步骤之一。本标准推荐采用商业化试剂盒进行DNA提取，确保提取效率和纯度。在提取过程中，需要特别注意防止外源DNA的污染。提取得到的DNA样品应保存在-20℃以下直至使用。

#### 3. 引物设计与选择

为了提高检测的特异性和灵敏度，标准强调了引物设计的重要性。所使用的引物必须能够特异性地扩增目标动物的特定基因序列。此外，引物的设计还需考虑其兼容性与PCR反应体系的匹配程度，以保证实验结果的准确性。

#### 4. 实验条件设置

实时荧光PCR反应的条件设定直接影响到检测结果的质量。标准规定了反应体系的组成、退火温度、循环次数等参数。例如，退火温度通常设定为60℃左右，循环次数一般为40次。这些参数的选择基于大量的前期试验数据，旨在达到最佳的检测效果。

#### 5. 结果分析

检测结束后，需对获得的数据进行综合分析。标准提供了详细的判断依据，如Ct值的范围、阳性对照和阴性对照的表现等。只有当样本的Ct值低于设定阈值且阳性对照呈阳性、阴性对照呈阴性时，才能判定该样本中含有目标动物源性成分。

#### 6. 质量控制

在整个检测过程中，质量控制贯穿始终。这包括但不限于定期校准仪器设备、使用标准物质作为参照、实施空白对照实验等措施。通过严格的质控程序，可以有效减少人为误差和技术偏差，从而保障检测结果的真实可靠。

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