DB34T 1943-2013 猪瘟病毒强毒株与疫苗株鉴别检测套式RT-PCR方法

DB34/T 1943-2013 是安徽省地方标准，规定了猪瘟病毒强毒株与疫苗株鉴别的套式RT-PCR检测方法。以下是对该标准中一些关键条文的详细解读：

1. 标准适用范围

本标准适用于猪瘟病毒强毒株与兔化弱毒疫苗株的区分检测。这一条明确了标准的应用场景和目的，确保检测结果能有效区分两种病毒株。

2. 术语和定义

- 套式RT-PCR：一种利用两次扩增反应来提高特异性和灵敏度的RT-PCR技术。

- 强毒株：能够引起猪瘟严重症状的病毒株。

- 疫苗株：经过人工减毒处理后用于预防接种的病毒株。

这些定义为后续实验操作提供了必要的理论基础。

3. 主要试剂与材料

- 引物设计：需要针对强毒株特异性序列设计内外两对引物。内引物扩增片段长度应短于外引物，以提高检测灵敏度。

- 阳性对照品：包含已知浓度的强毒株RNA。

- 阴性对照品：无核酸的缓冲液。

合理选择试剂是保证实验准确性的前提条件。

4. 检测步骤

- 样本准备：采集疑似感染猪的血液或组织样品，提取总RNA。

- 第一轮PCR扩增：使用外引物进行初次扩增。

- 第二轮PCR扩增：取第一轮产物稀释后作为模板，加入内引物进行二次扩增。

- 电泳分析：将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察是否有目标条带出现。

每一步骤都需严格按照操作规程执行，避免污染影响结果准确性。

5. 结果判定

- 若出现与阳性对照一致大小的目标条带，则判定为强毒株阳性；

- 如仅看到疫苗株特异性条带，则判定为疫苗株感染；

- 未见任何条带时，可能为阴性或检测失败，需重新采样复检。

结果判断依据清晰明确，有助于快速做出科学决策。

以上是对DB34/T 1943-2013标准中部分内容的重点解读，希望对你有所帮助。