DB35T 1327-2013 番鸭呼肠孤病毒RT-PCR检测方法

摘要：本文件规定了番鸭呼肠孤病毒的样品采集、RNA提取、RT-PCR扩增及结果分析的方法。本文件适用于番鸭呼肠孤病毒的实验室检测和诊断。
Title：Detection method of RT-PCR for Duck Reovirus in Muscovy Ducks
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：67.080

DB35/T 1327-2013《番鸭呼肠孤病毒RT-PCR检测方法》是一项福建省地方标准，规定了利用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术对番鸭呼肠孤病毒进行检测的具体操作流程和判定依据。以下是对该标准中几个关键条款的深度解读。

### 适用范围

本标准适用于番鸭呼肠孤病毒感染的诊断及流行病学调查。明确指出，该方法能够有效识别番鸭呼肠孤病毒的存在与否，为养殖业提供科学依据。

### 原理说明

基于RT-PCR原理，首先通过逆转录将病毒RNA转化为cDNA，然后利用特异性引物扩增目标基因片段，并借助荧光探针实时监测扩增过程中的荧光信号变化来判断样品中是否含有番鸭呼肠孤病毒。此过程确保了检测的高度灵敏性和准确性。

### 样品采集与处理

在实际操作前，需按照附录A的要求正确采集样本。通常选择血液、组织等作为检测材料。样本收集后应立即置于冰上运输至实验室，在-80℃条件下长期保存。若不能及时检测，则应在4℃冷藏不超过24小时。

### 试剂与设备

标准详细列出了所需的主要试剂清单，包括反转录酶、DNA聚合酶、特异性引物及探针等，并要求所有试剂均符合相关国家标准或行业规范。此外，还强调了仪器设备如实时荧光定量PCR仪的技术性能指标。

### 操作步骤

1. **提取核酸**：使用商业化试剂盒从样本中提取总RNA。

2. **RT-PCR反应体系构建**：按照试剂说明书配置反应混合液，加入模板RNA、上下游引物以及探针。

3. **扩增程序设置**：

- 预变性95℃ 10分钟；

- 循环条件为95℃ 15秒，60℃ 60秒，共40个循环；

- 最后进行溶解曲线分析以确认产物特异性。

4. **结果分析**：根据Ct值大小判断阳性与否。当Ct值≤35时判定为阳性；35＜Ct≤40且有明显扩增曲线则需重复实验；Ct＞40视为阴性。

### 质量控制

为了保证检测结果的可靠性，必须实施严格的质控措施。包括但不限于设立阴性质控品、阳性质控品以及内参对照。同时，每批次实验都应包含空白对照组，用于排除污染可能性。

### 结果报告

登陆阅读剩余内容

登陆 注册