DB22T 1821-2013 粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的PCR检测

DB22/T 1821-2013是吉林省地方标准，规定了粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的PCR检测方法。以下对标准中的关键内容进行详细解读。

标准适用于检测小麦、玉米等粮食样品中产单端孢霉烯族化合物真菌，如脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）相关真菌。标准规定了样品采集、前处理、DNA提取、PCR扩增及检测结果分析的全过程。

在样品采集环节，要求采集具有代表性的样品，确保样品量不少于500克，并按照GB/T 5497的规定执行。这一步骤是为了保证检测结果能够真实反映整个批次粮食的情况。

样品前处理部分，需要将样品粉碎并过筛，确保粒径小于1毫米。然后称取25克样品置于50毫升离心管中，加入10毫升磷酸盐缓冲液，振荡提取15分钟，以充分释放真菌DNA。

DNA提取采用商业化试剂盒，严格按照说明书操作。提取后的DNA需用紫外分光光度计测定浓度和纯度，A260/A280值应在1.8-2.0之间。

PCR扩增使用特异性引物，反应体系包括模板DNA、上下游引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶和缓冲液。反应条件为：94℃预变性5分钟；随后进行35个循环的94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸1分钟；最后72℃延伸10分钟。

结果分析时，电泳检测扩增产物，预期大小约为400bp。阳性对照出现清晰条带表明实验有效，样品出现相同条带则判定为阳性。

标准还强调了实验室质量控制要求，包括空白对照、阳性对照和阴性对照的设置，以及定期进行仪器校准和试剂验证。这些措施确保了检测结果的准确性和可靠性。

通过以上步骤，该标准提供了一种快速、灵敏的检测方法，用于评估粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的污染情况，保障食品安全。