DB42T 527-2009 无性系茶苗“二段法”快繁技术操作规程

摘要：本文件规定了无性系茶苗“二段法”快繁技术的操作流程、技术要求及管理措施。本文件适用于湖北省内无性系茶苗的快速繁殖及相关生产活动。
Title：Technical Operation Specifications for the \"Two-Stage Method\" Rapid Propagation of Asexual Tea Seedlings DB42T 527-2009
中国标准分类号：B61
国际标准分类号：65.020.20

DB42/T 527-2009《无性系茶苗“二段法”快繁技术操作规程》是湖北省地方标准，规定了无性系茶树品种通过组织培养实现快速繁殖的技术要求。以下是对该标准中关键条款的深度解读：

一、适用范围与术语定义

1. 本标准适用于无性系茶树品种的组培快繁生产。标准明确了“二段法”的概念，即先在初代培养阶段诱导无菌苗，再转入继代增殖阶段扩大繁殖。

2. 对关键术语进行了定义：

- 初代培养：首次将外植体接种到培养基上的过程。

- 继代培养：对初代培养获得的芽苗进行多次连续增殖培养的过程。

- 炼苗移栽：从组培瓶中取出试管苗并逐步适应外界环境的过程。

二、外植体的选择与处理

1. 外植体应选用当年生健壮嫩梢，长度约3-5厘米，带1-2片完全展开的真叶。这种选择有利于提高成活率和生长势。

2. 处理方法包括：

- 用70%-75%酒精浸泡30秒后立即用无菌水冲洗2-3次；

- 再用0.1%氯化汞溶液消毒8-10分钟，期间每隔2分钟轻轻摇动一次；

- 最后用无菌水冲洗6-8次，确保去除残留药剂。

三、培养基配制与灭菌

1. 培养基配方采用MS基本培养基，添加适量的植物激素如6-BA（细胞分裂素）和NAA（生长素），浓度分别为0.5mg/L和0.1mg/L。

2. pH值控制在5.8左右，琼脂浓度为6.5g/L。培养基分装后需高压蒸汽灭菌20分钟，确保无菌环境。

四、培养条件

1. 温度保持在25±2℃之间，相对湿度控制在70%-80%，光照强度为2000-3000lux，每日光照时间为12小时。

2. 在继代培养阶段，每20-25天更换一次培养基，每次增殖倍数控制在3-5倍。

五、炼苗与移栽

1. 当试管苗长至4-6厘米时开始炼苗，先打开培养瓶盖放置3-5天，然后逐渐移至温室条件下适应。

2. 移栽前需用清水清洗根部附着的培养基，并用1000倍稀释的多菌灵溶液浸泡10分钟预防病害。

六、注意事项

1. 整个过程中要严格遵守无菌操作规程，防止污染影响繁殖效果。

2. 定期检查培养室温湿度和光照条件，确保符合标准要求。

3. 对于出现污染或异常情况的培养瓶要及时隔离处理，避免扩散。

以上内容是对DB42/T 527-2009中核心条款的深入解析，希望对从事茶树快繁工作的技术人员有所帮助。