TCMBA 020-2023 人正常乳腺及乳腺癌类器官制备、冻存、复苏和鉴定操作指南

本文将聚焦于TCMBA 020-2023中关于乳腺癌类器官冻存复苏部分的新旧版本差异，并对新版中的冻存液配方应用方法进行详细解读。

在旧版标准中，乳腺癌类器官的冻存液主要采用基础培养基添加10%DMEM/F12和20%DMSO。而新版标准对此进行了优化，推荐使用含有10%DMEM/F12、20%FBS以及10%DMSO的复合型冻存液。这种调整的主要目的是为了提高类器官在冻存过程中的存活率和复苏后的功能保持能力。

具体应用时，首先需要准备含有10%DMEM/F12、20%FBS和10%DMSO的冻存液。然后将乳腺癌类器官消化后收集到离心管中，以800rpm的速度离心5分钟。去除上清液后，加入适量预冷的复合型冻存液重悬细胞，确保细胞密度适中。接下来分装到无菌冻存管中，每管约1ml，标记好相关信息。最后将冻存管放入程序降温盒中，按照-1℃/min的速度降至-80℃，之后转入液氮长期保存。

通过这种新的冻存液配方和操作流程，可以有效保护乳腺癌类器官的结构完整性与生物学活性，为后续研究提供高质量的实验材料。