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资源简介
摘要：本文件规定了葡萄酒中布鲁塞尔酒香酵母（Brettanomyces）的实时荧光PCR检测方法，包括样品处理、核酸提取、PCR扩增及结果判定。本文件适用于葡萄酒及其相关产品的布鲁塞尔酒香酵母检测。
Title：Detection of Brettanomyces in Wine - Real-time Fluorescent PCR Method
中国标准分类号：X46
国际标准分类号：67.200.10 -
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拓展解读
《TNAIA 0351-2024与旧版标准对比：布鲁塞尔酒香酵母检测实时荧光PCR法的应用》
在TNAIA 0351-2024《葡萄酒中布鲁塞尔酒香酵母的检测 实时荧光PCR法》中，相较于旧版标准，最显著的变化在于对定量阈值Ct值的设定和样品处理步骤的优化。本文将聚焦于Ct值的设定变化，对其应用方法进行详细解读。
在旧版标准中，Ct值的设定较为宽泛，通常为35-38之间，而新版标准将其精确调整为36±1。这一变化的核心目的是提高检测结果的准确性和一致性。Ct值是实时荧光PCR反应中荧光信号达到设定阈值时所对应的循环数，其数值直接反映样品中目标DNA的初始浓度。当Ct值过高时，可能意味着样本中的目标核酸含量过低，检测灵敏度不足；反之，若Ct值过低，则可能存在污染或非特异性扩增问题。因此，新版标准通过限定Ct值范围，确保了检测过程的严谨性。
实际操作中，实验室需严格按照以下步骤执行：首先，制备标准曲线，利用已知浓度的标准品进行梯度稀释，并记录对应的Ct值，构建线性关系模型。其次，在检测未知样品时，需先预估样品中目标DNA的浓度范围，选择合适的标准曲线进行比对。如果测得的Ct值超出36±1的范围，应重新取样或调整提取方法，以确保数据可靠性。此外，为验证检测系统的稳定性，还需设置阳性对照和阴性对照，确保整个实验过程无误。
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最后更新时间 2025-06-01
