TNAIA 0351-2024 葡萄酒中布鲁塞尔酒香酵母的检测 实时荧光PCR法

《TNAIA 0351-2024与旧版标准对比：布鲁塞尔酒香酵母检测实时荧光PCR法的应用》

在TNAIA 0351-2024《葡萄酒中布鲁塞尔酒香酵母的检测 实时荧光PCR法》中，相较于旧版标准，最显著的变化在于对定量阈值Ct值的设定和样品处理步骤的优化。本文将聚焦于Ct值的设定变化，对其应用方法进行详细解读。

在旧版标准中，Ct值的设定较为宽泛，通常为35-38之间，而新版标准将其精确调整为36±1。这一变化的核心目的是提高检测结果的准确性和一致性。Ct值是实时荧光PCR反应中荧光信号达到设定阈值时所对应的循环数，其数值直接反映样品中目标DNA的初始浓度。当Ct值过高时，可能意味着样本中的目标核酸含量过低，检测灵敏度不足；反之，若Ct值过低，则可能存在污染或非特异性扩增问题。因此，新版标准通过限定Ct值范围，确保了检测过程的严谨性。

实际操作中，实验室需严格按照以下步骤执行：首先，制备标准曲线，利用已知浓度的标准品进行梯度稀释，并记录对应的Ct值，构建线性关系模型。其次，在检测未知样品时，需先预估样品中目标DNA的浓度范围，选择合适的标准曲线进行比对。如果测得的Ct值超出36±1的范围，应重新取样或调整提取方法，以确保数据可靠性。此外，为验证检测系统的稳定性，还需设置阳性对照和阴性对照，确保整个实验过程无误。

综上所述，TNAIA 0351-2024对Ct值的精确设定，不仅提升了检测结果的准确性，还增强了标准的适用性。实验室工作人员在执行过程中，务必严格遵循操作规程，以保证检测结果的科学性和可信度。