TSBX 057-2022 鼠溶瘤痘苗病毒测定 实时荧光定量PCR法

TSBX 057-2022《鼠溶瘤痘苗病毒测定 实时荧光定量PCR法》相较于旧版标准，在检测方法和操作细节上进行了优化。其中，关于实时荧光定量PCR扩增体系的建立部分尤为关键。

以实时荧光定量PCR扩增体系为例，新版标准中对反应体系的成分比例和反应条件提出了更严格的要求。具体而言，模板DNA浓度应控制在100-500 ng/μL之间，反转录酶和Taq DNA聚合酶的用量需精确到微升级别，引物终浓度设定为0.2-0.4 μmol/L，探针终浓度为0.1-0.2 μmol/L。此外，退火温度从旧版标准中的55℃调整至60℃，延伸时间由30秒延长至45秒。

这些变化旨在提高检测灵敏度和特异性。例如，通过增加退火温度可以减少非特异性扩增，延长延伸时间有助于提高扩增效率。实际应用中，实验室技术人员需严格按照新版标准配置反应体系，并使用高精度移液器确保试剂添加量准确无误。同时，还需定期校准仪器设备，监控实验环境温湿度变化，以保证检测结果的可靠性。

遵循新版标准不仅能够提升鼠溶瘤痘苗病毒检测的准确性，还能有效避免因操作不当导致的假阳性或假阴性结果。