DB15T 1238—2024 绵羊肺腺瘤病毒双抗体夹心ELISA检测技术

DB15/T 1238—2024《绵羊肺腺瘤病毒双抗体夹心ELISA检测技术》是一项内蒙古自治区地方标准，为绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus, JSRV）的检测提供了规范化的操作流程和技术要求。以下是对该标准中一些关键条款的详细解读：

范围

标准适用于JSRV抗体的定量检测。这一范围明确了标准的应用领域，即主要用于科研、临床诊断以及动物健康监测等领域。

规范性引用文件

标准引用了GB/T 6682《分析实验室用水规格和试验方法》等文件。这些引用文件确保了实验用水的质量控制，从而保证检测结果的准确性。

术语和定义

- 双抗体夹心ELISA：通过两个特异性抗体分别结合病毒抗原的不同表位来实现对目标抗原的捕获和检测的方法。

- 临界值：判断样本是否阳性或阴性的分界点，通常设定为正常对照平均OD值的某一倍数（如2.1倍）。

技术要求

- 试剂准备：所有试剂需按照说明书配制，并在有效期内使用。特别强调了酶标抗体的工作浓度应精确调整至最佳水平。

- 样品处理：采集血液样本后立即分离血清，避免反复冻融以减少干扰因素。

- 操作步骤

- 包被液的pH值控制在7.4±0.2之间；

- 每孔加入适量包被抗体后密封孵育至少1小时；

- 洗涤过程采用专用洗板机完成，确保彻底清除未结合物质；

- 加入稀释好的待测样本，37℃条件下孵育30分钟；

- 再次洗涤后添加酶标抗体，继续孵育30分钟；

- 最终加入显色剂直至颜色变化明显为止；

- 使用酶标仪测定450nm处吸光度值。

结果计算与判定

- 计算公式：OD值=样品OD值-空白对照OD值

- 判定标准：若样品OD值大于等于临界值，则判定为阳性；反之则为阴性。

注意事项

- 实验室环境温度应保持恒定，避免因温差导致误差；

- 操作人员需经过专业培训，熟悉整个实验流程；

- 定期校准仪器设备，确保测量精度。

以上内容基于DB15/T 1238—2024标准进行了深入剖析，旨在帮助使用者更好地理解和应用该标准，提高检测效率和准确性。