DB36T 1904-2023 实验动物 支原体荧光定量PCR检测方法

《DB36/T 1904-2023实验动物支原体荧光定量PCR检测方法》是一项江西省地方标准，规定了实验动物支原体荧光定量PCR检测的范围、规范性引用文件、术语和定义、试剂材料、仪器设备、样品采集与保存、核酸提取、荧光定量PCR扩增体系及反应条件、结果判定等关键内容。以下将对其中的重要条文进行详细解读。

首先在范围部分，该标准适用于实验动物支原体的荧光定量PCR检测。这表明标准主要面向实验动物领域，为确保实验动物健康提供了技术依据。

在术语和定义部分，明确了支原体为一类无细胞壁的原核生物，其基因组较小，且支原体感染可能会影响实验结果。这一定义为后续检测工作奠定了理论基础。

对于样品采集与保存，标准要求使用无菌棉签或拭子从实验动物的鼻腔、咽喉、气管、肺部等部位采集样本，并立即置于含有保存液的采样管中，在4℃条件下保存不超过24小时，或在-70℃长期保存。这些具体的操作步骤确保了样品的新鲜度和完整性，从而提高检测准确性。

在核酸提取环节，标准指出应使用商品化的核酸提取试剂盒按照说明书操作，提取得到的DNA浓度需达到50ng/μL以上。这一要求保证了后续PCR反应有足够的模板量。

关于荧光定量PCR扩增体系及反应条件，标准详细规定了反应体系组成、反应体积、循环参数等内容。例如，反应体系包括引物、探针、酶、缓冲液等成分，总体积通常为20μL。循环参数则包括预变性、退火延伸等阶段的具体温度和时间设置。这些参数经过优化后能够有效扩增目标序列并产生特异性信号。

最后在结果判定方面，当Ct值小于等于设定阈值时判断为阳性，大于阈值时为阴性。同时建议对阳性结果进行重复验证以排除假阳性情况。这一严谨的结果判定流程有助于提高检测结果的可靠性。

总之，《DB36/T 1904-2023》通过明确各个环节的技术细节，为实验动物支原体荧光定量PCR检测提供了科学规范的方法指导。