DB43T 2812-2023 普通丝瓜杂交种纯度鉴定（SSR法）技术规程

DB43/T 2812-2023《普通丝瓜杂交种纯度鉴定 SSR法》是一项湖南省地方标准，用于指导通过简单重复序列（SSR）分子标记技术对普通丝瓜杂交种的纯度进行检测。以下为标准中几个关键条文的详细解读：

一、适用范围

本标准适用于普通丝瓜杂交种纯度的鉴定工作，包括种子生产单位、质量监督检验机构等。

二、术语和定义

1. 纯度：指在供检样品中目标品种所占比例，以百分率表示。

2. SSR标记：利用简单重复序列引物扩增DNA片段的技术手段。

三、抽样方法

1. 样品采集：从待检批次中随机抽取不少于50株植株作为样本。

2. 标记处理：每株取新生叶片约0.1克，立即置于液氮中保存或直接提取DNA。

四、DNA提取与检测

1. 提取要求：使用适合植物材料的DNA提取试剂盒，确保DNA浓度≥20ng/μL，A260/A280值在1.8～2.0之间。

2. 扩增体系：反应总体积20μL，含模板DNA10～50ng，上下游引物各0.2μmol/L，dNTPs 0.2mmol/L，Taq酶1U。

五、结果判定

1. 数据分析：将扩增产物电泳后得到的图谱与参考标准进行比对，计算目标品种特异性条带出现频率。

2. 判定规则：当目标品种特异性条带频率≥99%时，认定为该品种纯度合格；若低于此值，则需进一步调查原因并重新取样检测。

六、注意事项

1. 实验环境应保持清洁无污染，避免交叉感染。

2. 操作人员须经过专业培训，熟悉设备使用及实验流程。

3. 定期校准仪器设备，保证检测结果准确可靠。

以上是该标准中的核心内容，旨在规范普通丝瓜杂交种纯度鉴定过程，提高检测效率和准确性。希望相关从业者能够严格按照标准执行，保障农业生产用种安全。