DB15T 3147—2023 番茄颈腐根腐病病原菌鉴定规程

摘要：本文件规定了番茄颈腐根腐病病原菌（*Phytophthora nicotianae*）的样品采集、分离纯化、形态学鉴定及分子生物学鉴定方法。本文件适用于番茄颈腐根腐病病原菌的检测与鉴定，为植物检疫和病害防控提供技术依据。
Title：Identification Procedure for Pathogen of Tomato Neck and Root Rot - Phytophthora nicotianae
中国标准分类号：B 46
国际标准分类号：65.020

DB15/T 3147—2023《番茄颈腐根腐病病原菌鉴定规程》是一项内蒙古自治区的地方标准，该标准为番茄颈腐根腐病病原菌的鉴定提供了科学规范的方法。以下将选取其中的重要条文进行详细解读。

### 标准适用范围

标准适用于内蒙古地区番茄种植过程中因颈腐根腐病而引发的病原菌鉴定。这表明该标准主要针对的是内蒙古地区的特定环境条件下的病害问题，具有很强的地域针对性。

### 样品采集与处理

标准中规定了样品采集的时间、地点以及方法。要求在发病初期选择典型的病株进行采样，并且要注意避免污染。样品采集后需立即送往实验室，在4℃条件下保存不超过24小时。这一环节强调了及时性和无菌操作的重要性，确保后续实验数据的有效性。

### 显微镜检查

通过显微镜观察病原菌的形态特征是鉴定的关键步骤之一。标准指出需要使用光学显微镜对病原菌的孢子形态、大小及排列方式进行详细记录。此外还提到可以采用扫描电子显微镜进一步确认某些细微结构，如孢子刺或附属丝等。

### 分离培养

为了获得纯化的病原菌株，标准推荐了几种常用的分离技术，包括稀释涂布法和平板划线法。同时明确了培养基的选择标准，建议使用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）作为基础培养基，并根据实际情况调整pH值至适当范围。培养温度一般设定为25°C左右，时间为5-7天。

### 生化特性分析

生化特性分析是区分不同种类病原菌的重要手段。标准中列出了多项检测项目，比如碳源利用能力、氮源吸收效率、酶活性测定等。这些测试可以帮助研究人员了解病原菌的基本代谢途径及其适应环境的能力。

### 分子生物学检测

随着分子生物学技术的发展，PCR扩增成为鉴定病原菌不可或缺的一部分。标准中特别提到了使用特异性引物进行DNA扩增，并通过凝胶电泳来验证扩增结果。这种方法能够快速准确地识别目标病原菌，尤其适用于复杂样本中的微量病原体检测。

### 结果判定

最后一步是对所有收集到的信息进行综合分析，得出最终结论。标准强调了结果判断时应结合临床症状、显微镜观察、培养特征及分子生物学证据等多个方面进行全面考量。只有当各项指标均符合预期时才能确定病原菌身份。

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