DB15T 2956—2023 马铃薯干腐病菌PCR检测方法

摘要：本文件规定了马铃薯干腐病菌（Fusarium sambucinum）PCR检测方法的术语和定义、样品采集与处理、DNA提取、PCR扩增、结果分析及检测报告。本文件适用于马铃薯干腐病菌的实验室检测与鉴定。
Title：Detection Method of Fusarium sambucinum in Potato by PCR
中国标准分类号：B 46
国际标准分类号：65.020.01

DB15/T 2956—2023《马铃薯干腐病菌PCR检测方法》是内蒙古自治区制定的一项地方标准，该标准为快速准确地检测马铃薯干腐病菌提供了技术依据。以下是对标准中一些关键条款的详细解读：

1. 范围：本标准规定了利用PCR技术检测马铃薯干腐病菌的方法。适用于从疑似感染马铃薯干腐病菌的植株样本中提取DNA，并通过PCR扩增特定基因片段来判断是否感染该病原菌。

2. 规范性引用文件：明确了在执行本标准时需要参考的相关国家标准或行业标准。这些文件构成了本标准的基础框架，确保了检测方法的一致性和权威性。

3. 术语和定义：对“马铃薯干腐病菌”、“PCR”等专业术语进行了明确定义，有助于使用者正确理解标准内容。

4. 原理：描述了利用PCR技术检测马铃薯干腐病菌的基本原理。即通过特异性引物扩增目标DNA序列，然后通过电泳分析扩增产物，从而判断样品中是否存在马铃薯干腐病菌。

5. 试剂与材料：列出了实验所需的主要试剂和耗材，包括但不限于DNA提取试剂盒、PCR反应体系成分、琼脂糖凝胶等。要求所有试剂均需符合相关质量标准。

6. 仪器设备：指出了进行实验所需的仪器设备，如生物安全柜、离心机、恒温金属浴、电泳仪、紫外成像系统等。强调了设备性能对于检测结果准确性的重要性。

7. 样品采集与处理：详细说明了如何正确采集马铃薯植株样本以及后续的预处理步骤。要求样本新鲜且具有代表性，同时注意防止污染。

8. DNA提取：给出了具体的DNA提取流程，包括组织破碎、裂解、纯化等环节。特别强调了操作过程中要严格遵守无菌操作规程，避免外源DNA污染。

9. PCR扩增：规定了PCR反应体系的组成及条件设置，如模板量、引物浓度、退火温度等参数的选择原则。还提出了优化PCR条件的具体方法。

10. 结果判定：根据电泳图谱中的条带位置和亮度来判断样品是否含有马铃薯干腐病菌。当阳性对照出现清晰条带而阴性对照未见任何条带时，则认为实验有效。

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