DB12T 1189-2023 牛亲子鉴定技术流程

摘要：本文件规定了牛亲子鉴定的技术流程，包括样本采集、DNA提取、遗传标记分析、数据处理及结果判定等内容。本文件适用于牛的亲子关系鉴定及相关研究工作。
Title：Technical Process for Bovine Parentage Testing
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：07.080

牛亲子鉴定技术在现代畜牧业中具有重要意义，它能够帮助养殖场准确判断牛只之间的亲缘关系，为选种、育种以及遗传资源保护提供科学依据。DB12/T 1189-2023《牛亲子鉴定技术规程》是由天津市市场监督管理局发布的一项地方标准，旨在规范牛亲子鉴定的操作流程和技术要求。以下将选取该标准中的几个关键条文进行详细解读。

### 样品采集与保存

根据标准第4.1条，样品采集应遵循无创原则，优先选择耳缘组织或毛发作为样本。具体操作时，使用消毒过的工具从牛的耳缘剪取一小块组织，或者拔取带有毛囊的毛发若干根。采集后的样品需立即放入专用的密封袋中，并标注清楚样本信息如编号、采样日期等。此外，标准强调了样品保存的重要性，要求将样品置于低温环境中（通常为-20℃以下），以保证DNA的完整性直至检测完成。

### DNA提取

标准第5.1条规定了DNA提取的方法选择，推荐采用商品化的DNA提取试剂盒进行操作。实验过程中需要注意控制好裂解液的温度和时间，确保细胞壁被充分破坏，同时避免RNA酶对DNA造成降解。提取完成后，通过紫外分光光度计测定DNA浓度及纯度，合格的DNA样本OD260/OD280值应在1.8左右。

### PCR扩增与STR分型

按照标准第6.1条的要求，在进行STR（短串联重复序列）分析之前，需要先设计特异性引物。这些引物应当覆盖多个已知的微卫星位点，以便获得足够多的信息用于亲子鉴定。PCR扩增反应体系需严格按照试剂说明书配置，包括模板DNA、引物、dNTPs、缓冲液以及热稳定DNA聚合酶。扩增结束后，利用毛细管电泳仪分离扩增产物并记录峰图数据，最后通过专业软件比对分析得到每个位点的等位基因大小。

### 数据处理与结果判定

标准第7.1部分明确了如何处理实验所得的数据。首先，要对所有参与鉴定个体的所有STR位点的结果进行一致性检查，排除可能存在的污染或错误。然后，计算父子代之间共享等位基因的比例，当该比例达到一定阈值（例如95%以上）时，则可以初步认定存在亲子关系。最终结论还需结合其他证据综合考量，比如母系遗传特征等。

### 质量控制措施

为了保证鉴定结果的可靠性，标准还特别强调了质量控制的重要性。这包括但不限于定期校准仪器设备、建立内部质控标准品库、开展人员培训等方面内容。同时，建议实验室制定详细的SOP文件，明确每一步骤的操作细节，确保整个工作流程的一致性和可追溯性。

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