THBIQA 0003.5-2024 食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法 第5部分：竹筴鱼 实时荧光 PCR法

摘要：本文件规定了食品中竹筴鱼源性成分的实时荧光PCR检测方法，包括样品制备、DNA提取、PCR扩增及结果分析等内容。本文件适用于食品中竹筴鱼源性成分的定性检测。
Title：Detection Method of Histamine-forming Fish Components in Food - Part 5: Real-time Fluorescent PCR Method for Scad
中国标准分类号：X43
国际标准分类号：67.200.99

在THBIQA 0003.5-2024《食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法 第5部分：竹筴鱼 实时荧光PCR法》中，一个重要的变化体现在样品前处理步骤上。与旧版相比，新版标准对竹筴鱼样本的提取液浓度要求更为严格，并且增加了对提取效率验证的具体操作说明。

例如，在旧版标准中，对于竹筴鱼样本的DNA提取仅规定了使用商业试剂盒完成基本步骤，但并未明确最终提取液的浓度范围。而在新版标准中，则明确规定了提取后的DNA溶液OD260/OD280比值应在1.7至2.0之间，同时要求通过内参基因扩增曲线来确认提取效率是否达到预期标准。

这种改变的意义在于提高了检测结果的一致性和准确性。当OD260/OD280比值低于1.7时，可能意味着存在蛋白质或其他杂质污染；而高于2.0则可能是RNA污染所致。通过这样的控制可以有效避免因样本质量问题导致的假阴性或假阳性结果。此外，利用内参基因进行效率验证也能够帮助实验室工作人员及时发现并解决样本制备过程中可能出现的问题。

因此，在实际应用该方法时，操作人员应当严格按照新版标准的要求执行样品前处理流程，包括但不限于正确选择和使用试剂、优化反应条件以及定期校准仪器设备等措施，以确保获得可靠的数据支持。