THBIQA 0003.4-2024 食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法 第4部分秋刀鱼 实时荧光 PCR 法

摘要：本文件规定了食品中常见高组胺鱼源性成分（秋刀鱼）的实时荧光PCR检测方法，包括样品处理、DNA提取、PCR扩增及结果判定等内容。本文件适用于食品中秋刀鱼源性成分的定性检测。
Title：Detection Method of Common High Histamine Fish Components in Food - Part 4: Sardine Real-time Fluorescent PCR Method
中国标准分类号：B21
国际标准分类号：67.050

在THBIQA 0003.4-2024《食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法 第4部分 秋刀鱼 实时荧光PCR法》中，有一项重要的更新涉及实时荧光PCR检测体系中的引物和探针设计。新版本对原有引物序列进行了优化，以提高检测灵敏度和特异性。

原标准中使用的引物序列存在非特异性扩增的问题，在某些情况下可能导致假阳性结果。新版标准通过调整引物长度及退火温度，成功解决了这一问题。具体来说，新版本将引物长度从原来的18bp增加到25bp，并且调整了引物GC含量至50%-60%，确保了引物与模板DNA结合更加稳定。

为了验证新引物的有效性，研究人员进行了大量实验。他们使用不同浓度的标准品进行梯度稀释后扩增，结果显示新引物能够准确地检测出最低检出限为10 copies/μL的目标DNA。此外，在实际样品测试过程中，新引物表现出更高的重复性和稳定性，减少了因操作误差造成的偏差。

应用新引物时需要注意以下几点：首先，在设计反应体系时要严格控制反应条件如镁离子浓度、dNTPs用量等；其次，对于未知来源的样品需先进行预试验来确认是否存在干扰物质影响检测效果；最后，当遇到复杂基质背景下的样本时可考虑采用多重PCR技术进一步提升鉴定准确性。

总之，通过对实时荧光PCR检测体系中引物的设计改进，新版标准显著增强了秋刀鱼成分检测的可靠性和精确度，这对于保障食品安全具有重要意义。

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