THBIQA 0003.1-2024 食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法 第1部分蓝圆鰺 实时荧光PCR 法

在THBIQA 0003.1-2024《食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法 第1部分 蓝圆鰺 实时荧光PCR法》中，有一项重要的更新是关于内标系统的改进。相较于旧版标准，新版对内标系统的要求更加严格，确保了检测结果的准确性和可靠性。

以新版标准中的内标设计为例，其核心在于引入了一种特异性更强、稳定性更高的内标序列。这一改动旨在解决因样本处理过程中可能出现的核酸降解或扩增抑制等问题导致的假阴性情况。具体应用时，实验人员需按照以下步骤操作：

首先，在提取目标DNA的同时，加入已知浓度的标准内标DNA溶液。该内标应与待测样本在同一反应体系中进行扩增，但其序列设计上要保证不会与任何可能存在的靶标序列发生交叉反应。

其次，在实时荧光PCR扩增阶段，使用专门针对内标序列设计的引物和探针组合。通过设置合适的循环阈值（Ct值），可以同时监测到内标信号和目标基因信号的变化趋势。如果内标未能正常扩增，则表明整个实验过程可能存在技术问题，如试剂失效或者操作失误等。

最后，根据内标曲线计算出样本中实际存在的目标基因拷贝数，并以此评估检测结果的有效性。值得注意的是，内标的加入不仅能够校正样品间的差异，还能有效排除非特异性扩增带来的干扰因素。

总之，新版标准通过优化内标系统的设计与应用流程，显著提高了实时荧光PCR法对于蓝圆鰺这种高组胺鱼类成分检测的准确性与可信度。这为食品安全监管提供了更为科学严谨的技术支持。