DB43T 1957-2020 稻曲病菌分子检测技术规程

DB43/T 1957-2020《稻曲病菌分子检测技术规程》是一项湖南省地方标准，规定了稻曲病菌分子检测的技术要求。以下为重要条文的详细解读：

样品采集与保存

该标准明确指出，样品采集应选择典型发病的稻谷或稻株作为样本。采样时需注意避免污染，并将样本密封保存于低温环境中，以保持其活性和完整性。这一环节直接关系到后续实验结果的准确性。

基因组DNA提取

标准中提到采用CTAB法提取基因组DNA。具体操作包括使用液氮研磨组织样本，加入裂解液后置于65℃水浴锅中保温1小时，再通过氯仿-异戊醇抽提、无水乙醇沉淀等步骤获得高纯度DNA。此过程对确保后续PCR反应的成功至关重要。

PCR扩增条件

PCR反应体系中引物浓度设定为0.2μmol/L，反应总体积25μL，退火温度为58℃，延伸时间为72℃下30秒。循环次数为35次。这些参数的选择基于大量实验验证，能够有效扩增目标片段。

结果判定

利用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。当出现约200bp大小的目标条带时，可判定为稻曲病菌阳性。此外，还需设置阴性对照和阳性对照以保证实验结果可靠。

以上内容是该标准的核心部分，正确执行这些步骤对于准确检测稻曲病菌具有重要意义。