DB32T 3762.16-2021 新型冠状病毒检测技术规范 第16部分：核酸数字PCR法

摘要：本文件规定了新型冠状病毒核酸数字PCR检测的原理、试剂与材料、仪器设备、样品采集与处理、检测步骤、结果分析和报告、性能验证等内容。本文件适用于采用数字PCR技术进行新型冠状病毒核酸检测的医疗机构和实验室。
Title：Technical Specification for Coronavirus Detection - Part 16: Digital PCR Method for Nucleic Acid Detection
中国标准分类号：C44
国际标准分类号：11.020

DB32/T 3762.16-2021《新型冠状病毒检测技术规范 第16部分：核酸数字PCR法》是一项针对新冠病毒核酸检测的技术标准，主要规定了使用数字PCR方法进行新冠病毒检测的操作流程、质量控制和结果报告等要求。以下是对该标准中一些重要条文的详细解读。

### 样品采集与处理

标准要求样品应由经过培训的专业人员按照标准操作程序采集，并且需要在样本采集后尽快送往实验室进行检测。如果不能立即检测，则需将样品保存在适当的条件下以防止降解。样品处理过程中要确保无污染，所有使用的设备和耗材都必须是无DNA/RNA酶的。

### 实验室环境与安全

实验室应当具备独立的空间用于核酸提取和扩增反应，避免交叉污染。实验室内应配备必要的生物安全设施，如生物安全柜，并且工作人员必须穿戴适当的个人防护装备。此外，实验室还应该定期对环境进行清洁消毒，并记录相关情况。

### 数字PCR检测步骤

#### 核酸提取

使用合适的试剂盒从样本中提取RNA。提取后的RNA浓度和纯度需要用紫外分光光度计测定，确保其符合后续实验的要求。

#### 反应体系配置

根据数字PCR仪器说明书配置反应混合物，包括特异性引物、探针、酶以及模板DNA或cDNA。每个反应孔内加入相同体积的混合液，保证反应条件的一致性。

#### 扩增及数据分析

将配置好的反应液加载到数字PCR芯片上，按照设定好的程序进行热循环扩增。扩增结束后，利用软件分析数据，计算出目标基因拷贝数。

### 质量控制

为了保证检测结果的准确性，标准强调了质量控制的重要性。这包括但不限于设置阳性对照、阴性对照以及空白对照；对于每批测试至少运行一次内部质控品来验证整个过程的有效性；同时还要定期评估仪器性能并记录维护保养信息。

### 结果解释与报告

最终的结果需要基于统计学原理做出判断。当检测到的目标序列超过预设阈值时可以判定为阳性；反之则认为是阴性。所有的检测结果都应该形成书面报告提交给医生或其他相关人员参考决策。

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