DB21T 3559-2021 软枣猕猴桃品种鉴别技术规程 SSR分子标记法

DB21/T 3559-2021《软枣猕猴桃品种鉴别技术规程 SSR分子标记法》是一项辽宁省地方标准，为软枣猕猴桃品种的分子鉴定提供了科学依据。以下是该标准中几个关键条款的详细解读：

样品采集与DNA提取

标准要求选择健康、无病害的新梢作为样本，确保样本具有代表性。在DNA提取过程中，应使用高质量的试剂盒，并严格按照操作步骤执行，以保证DNA的质量和纯度。这一步骤对于后续PCR扩增至关重要，直接影响到检测结果的准确性。

引物设计与筛选

根据软枣猕猴桃品种的特点，设计特异性引物时需考虑种间差异性及遗传稳定性。通过预实验筛选出能够稳定扩增且具有明显差异性的引物组合，这是确保SSR标记有效性的基础。标准强调了引物序列长度、GC含量以及退火温度等因素对扩增效果的影响。

PCR反应体系建立

建立优化后的PCR反应体系是获得清晰可靠图谱的关键环节。此部分规定了模板DNA浓度、dNTPs、Mg²⁺离子浓度等参数的最佳范围，并指出不同成分的比例调整需基于具体实验条件反复验证。此外还提到反应体积通常为20μL左右，并建议采用梯度PCR仪寻找最适退火温度。

数据分析与结果判定

数据处理时首先利用专业软件读取电泳图像，记录每个位点上的等位基因数目及其大小。接着比较目标品种与其他已知品种间的相似系数或距离矩阵，以此来判断两者是否属于同一类别。当相似度低于某一阈值（如75%）时，则可认为存在显著区别，从而实现准确的品种鉴别。

注意事项

在实际应用中还需注意避免污染源引入导致假阳性现象发生；同时由于环境因素可能会影响某些微卫星座位的表现型特征，因此在长期监测过程中应当定期更新数据库并重新校准相关指标。另外，对于一些罕见或新发现的突变类型，应及时补充进现有的鉴定体系内，以保持其时效性和实用性。