DB53T 1058-2021 滇金丝猴个体识别分子技术规程

摘要：本文件规定了滇金丝猴个体识别的分子技术方法，包括样本采集、DNA提取、PCR扩增、基因序列分析及数据处理等内容。本文件适用于滇金丝猴种群研究、个体识别及保护管理等相关工作。
Title：Molecular Technical Procedures for Individual Identification of Golden Monkeys (Rhinopithecus bieti)
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：07.100.99

滇金丝猴是我国特有的珍稀濒危灵长类动物，其个体识别对于种群保护和管理至关重要。DB53/T 1058-2021《滇金丝猴个体识别分子技术规程》为开展这项工作提供了科学规范的技术指导。以下将重点解读规程中的关键内容。

规程中规定了样本采集的基本要求：采集血液、毛发或粪便等样本时要确保无污染且具有代表性。例如，毛发样本需从尾部或背部采集至少50根以上带毛囊的毛发；粪便样本应在新鲜排出后立即收集，并避免外界污染。这些措施可以保证后续DNA提取的质量。

在DNA提取环节，规程推荐使用商业化试剂盒结合改良的CTAB法。对于血液样本可直接使用试剂盒；而对于粪便样本，则需要先通过蛋白酶K消化再进行提取。此外还强调了提取过程中应严格控制温度与时间参数以提高DNA纯度和浓度。

扩增反应部分明确了引物设计原则以及PCR体系组成。推荐采用多态性较高的微卫星位点作为遗传标记来进行个体识别。每个反应体系中均包含正向引物、反向引物、dNTPs、Taq酶及相应缓冲液等成分，并且要求设置阳性对照和阴性对照来验证实验可靠性。

电泳检测步骤中提到可根据实际情况选择变性聚丙烯酰胺凝胶电泳或者毛细管电泳两种方式。前者适用于手动操作的小规模研究；后者则适合大批量样本的同时分析。无论采用何种方法都必须准确记录每个等位基因片段大小及其对应的强度值。

最后规程还特别指出结果解释时要注意排除假阳性情况的发生。当两个或多个个体间出现相同等位基因组合时需进一步通过增加更多遗传标记或者重新采样等方式加以确认。同时建议建立数据库存储所有已知个体的信息以便于长期跟踪监测。

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