TCSBM 0050.4-2024 创面修复材料有效性评价 第4部分：体外微血管形成试验评价方法

在TCSBM 0050.4-2024《创面修复材料有效性评价 第4部分：体外微血管形成试验评价方法》中，与旧版相比，体外微血管形成的评价指标得到了进一步细化。其中，“血管生成相关因子表达水平测定”这一条文在新版本中有了更具体的操作要求。

以“血管生成相关因子表达水平测定”为例，在实际应用时需注意以下几点：

首先，样本处理过程中，细胞培养至对数生长期后，应加入待测创面修复材料提取液或其成分溶液，设置空白对照组、阳性对照组以及不同浓度的实验组，每组至少3个复孔。在孵育结束后，使用胰酶消化收集细胞，并采用RIPA裂解缓冲液制备蛋白样品。

其次，在Western Blot检测时，蛋白样品经SDS-PAGE电泳分离后转膜，封闭后分别加入VEGF、bFGF等血管生成相关因子的一抗，4℃过夜孵育。次日室温下孵育二抗1小时，ECL显色后曝光。通过灰度扫描分析各组因子表达量，以β-actin为内参校正。

此外，RT-qPCR检测同样需要设立相应对照组，提取RNA后逆转录成cDNA，利用特异性引物扩增目标基因。反应体系中加入SYBR Green荧光染料，仪器自动记录Ct值，根据2^-ΔΔCt法计算相对表达量。

通过上述规范化的操作流程，可以准确评估创面修复材料对血管生成相关因子表达的影响，为产品有效性提供科学依据。