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摘要:本文件规定了H7N7亚型马流感病毒HA和NA基因的荧光RT-PCR检测方法的技术要求、操作步骤及结果判定。本文件适用于H7N7亚型马流感病毒的实验室检测与诊断。
Title:Fluorescent RT-PCR Detection of HA and NA Genes of H7N7 Subtype Equine Influenza Virus - Part 4: H7N7 Subtype
中国标准分类号:C46
国际标准分类号:11.020
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拓展解读
DB22/T 3172.4-2020 是一项关于流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测的技术规范,主要针对H7N7亚型马流感病毒的检测。这项标准为实验室提供了操作指南,确保检测结果准确可靠。以下将对标准中的重要条文进行详细解读。
样品采集与处理
标准要求样品采集应在专业人员指导下进行,确保样本质量。对于疑似感染的动物,应采集鼻腔、咽喉或气管分泌物以及血液样本。样本需立即置于无菌容器中,并尽快送至实验室检测。如果无法及时检测,样本应保存在-70℃以下环境中。
实验室环境要求
实验室应符合生物安全二级(BSL-2)的要求,配备必要的个人防护装备如手套、口罩及实验服等。实验台面需定期清洁消毒,使用过的耗材应按照规定方法妥善处理。
检测试剂与设备
试剂的选择至关重要,必须选用经过验证有效的试剂盒。仪器设备如荧光定量PCR仪需定期校准维护以保证其性能稳定。此外还需准备标准品、阳性对照及阴性对照用于质控。
操作步骤详解
1. 核酸提取:采用商业化试剂盒按照说明书操作提取RNA。
2. 反应体系配置:按照试剂盒说明书配制反应混合液,加入引物探针。
3. 扩增程序设定:设定合适的退火温度、延伸时间等参数。
4. 数据分析:根据Ct值判断是否为阳性,同时结合标准曲线计算病毒载量。
结果判定
当Ct值小于阈值时视为阳性,大于阈值则为阴性。若出现可疑结果,则需要重复实验或采用其他方法进一步确认。
注意事项
- 所有操作均需严格遵守无菌原则。
- 实验过程中产生的废弃物须按医疗废物处理。
- 定期参加能力验证活动提升技术水平。
通过以上解读可以看出,《DB22/T 3172.4-2020》不仅涵盖了从样本采集到最终报告出具全过程的技术细节,还特别强调了实验过程中的安全性与准确性控制,这对于保障检测质量具有重要意义。