DB15T 2027—2020 马源性成分检测方法 实时荧光PCR法

摘要：本文件规定了动物源性食品中马源性成分的检测方法——实时荧光PCR法。本文件适用于肉类及其制品、饲料等样品中马源性成分的定性检测。
Title：Detection Method of Horse-Origin Components - Real-Time Fluorescent PCR Method
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：67.050

DB15/T 2027—2020《马源性成分检测方法 实时荧光PCR法》是一项内蒙古自治区的地方标准，旨在规范使用实时荧光PCR技术对食品中马源性成分的检测流程与结果判定。以下是该标准中一些重要条文的详细解读：

### 样品采集与处理

标准指出，在采集样本时应确保样品具有代表性，并且在运输和保存过程中要避免污染或DNA降解。对于固体样品，通常需要粉碎后混匀再取样；液体样品则需充分摇匀后抽取。所有操作都应在无菌条件下进行，以保证检测结果的真实性。

### 提取核酸

提取核酸是整个检测过程的关键步骤之一。标准推荐采用商业化试剂盒来完成这一环节，强调了高质量核酸对于后续扩增反应的重要性。同时要求操作人员严格遵守说明书中的操作规程，注意防止交叉污染。

### 引物设计与合成

引物的设计直接影响到检测的特异性和灵敏度。本标准特别提到，引物序列应该针对马特异性基因区域进行设计，并经过BLAST比对验证其唯一性。此外，还需考虑引物长度、GC含量等因素，以优化扩增效率。

### 实验条件设置

在实验条件设定方面，标准给出了详细的参数建议，包括退火温度、循环次数等。这些参数的选择不仅影响到检测速度，还关系到最终结果的准确性。例如，适当的退火温度可以提高特异性，而合理的循环数则能保证足够的信号强度。

### 数据分析与结果解释

数据分析部分强调了使用专门软件对扩增曲线进行处理的重要性。通过设定合适的阈值线和基线范围，能够准确判断是否存在目标基因的存在。当Ct值低于设定阈值时，视为阳性；高于此值则为阴性。值得注意的是，任何异常情况都需要重新检测确认。

### 质量控制

为了确保检测结果可靠，标准还提出了质量控制的要求。这包括但不限于设立阳性对照、阴性对照以及空白对照等措施。只有当所有对照均符合预期结果时，才能认为本次实验有效。

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