TZNZ 252-2024 配方乳粉中蜡样芽胞杆菌的分离鉴定和毒力基因的检测

在TZNZ 252-2024《配方乳粉中蜡样芽胞杆菌的分离鉴定和毒力基因检测》标准中，有一处重要的更新值得深入探讨，即“毒力基因检测方法”的改进。相较于旧版标准，新版引入了更灵敏、特异的PCR技术，并明确了具体的引物设计原则与操作步骤。

根据TZNZ 252-2024的规定，在对配方乳粉样品进行蜡样芽胞杆菌分离后，需进一步通过PCR方法检测其是否携带毒力基因。这一过程首先要求从疑似菌落中提取高质量的DNA模板。实际操作时，可采用商业化试剂盒完成这一步骤，确保提取效率和纯度满足后续实验需求。

接下来是关键的PCR反应体系配置。以检测entA毒力基因为例，推荐使用如下引物序列：正向引物5'-AGCGTTGACGATGCCGAAG-3'，反向引物5'-CGTCGGCTTGCCGTATTTC-3'。扩增反应总体积通常设定为25μL，其中包含12.5μL的2×Master Mix、各0.5μL的上下游引物（10μM）、2μL模板DNA以及适量的无菌水补足体积。反应条件一般设置为95℃预变性5分钟；随后进行35个循环，每个循环包括94℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒；最后于72℃终延伸5分钟。

值得注意的是，在实际应用过程中，还需严格控制实验室环境避免污染，并设置阴性和阳性对照以验证结果的有效性。此外，为了提高检测结果的可靠性，建议采用熔解曲线分析来确认扩增产物的特异性。

通过以上方法，可以有效判断配方乳粉中是否存在携带特定毒力基因的蜡样芽胞杆菌，从而保障食品安全。