DB37T 3997—2020 细菌耐药基因blaNDM常见亚型的环介导等温扩增检测技术

摘要：本文件规定了细菌耐药基因blaNDM常见亚型的环介导等温扩增（LAMP）检测技术的原理、试剂与材料、仪器设备、操作步骤、结果判定及注意事项。本文件适用于临床、环境及食品中细菌耐药基因blaNDM常见亚型的快速检测。
Title：Detection Technology of Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) for Common Subtypes of Bacterial Drug Resistance Gene blaNDM
中国标准分类号：B10
国际标准分类号：11.020

《DB37/T 3997—2020细菌耐药基因blaNDM常见亚型的环介导等温扩增检测技术》是一项地方标准，该标准规定了利用环介导等温扩增（LAMP）技术检测细菌耐药基因blaNDM常见亚型的方法。以下是对标准中一些关键条款的详细解读。

### 范围与术语

标准适用于临床样本中细菌耐药基因blaNDM常见亚型的快速检测。其中术语“环介导等温扩增”是指在恒定温度下使用特异性引物对目标DNA片段进行高效扩增的技术。这一技术无需复杂的仪器设备，适合于基层医疗机构使用。

### 原理

LAMP技术通过设计针对靶序列不同区域的六条特异性引物，在等温条件下实现对目标基因的特异性扩增。标准指出，blaNDM基因具有高度保守性，因此选用其保守区作为扩增靶点，确保检测结果的准确性。

### 样品采集与处理

样品应从患者感染部位采集，如血液、尿液或伤口分泌物等。样品处理时需注意无菌操作，避免污染。样品处理后需立即进行DNA提取，推荐使用商品化试剂盒以保证提取效率和纯度。

### DNA提取

DNA提取是影响检测灵敏度的关键步骤。标准建议采用磁珠法或其他高效提取方法，确保提取出的DNA浓度不低于10ng/μl，并且A260/A280比值应在1.8-2.0之间。

### LAMP反应体系建立

LAMP反应体系包括模板DNA、Bst DNA聚合酶、特异性引物、dNTPs以及反应缓冲液。标准要求每个反应体系的总体积为25μl，其中模板DNA量控制在0.5-1.0μl之间。引物的设计需覆盖靶序列的不同区域，以提高扩增特异性。

### 扩增条件

LAMP扩增通常在60-65℃条件下进行，时间为40-60分钟。标准强调，扩增结束后需立即终止反应，防止非特异性扩增产物的影响。扩增产物可通过肉眼观察或荧光检测仪检测。

### 结果判定

阳性结果表现为扩增管内液体颜色变化或荧光信号出现，而阴性对照则保持不变。标准特别指出，若出现非特异性扩增，则需重新设计引物并重复实验。

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