DB13T 5112-2019 棉花杂交种真实性和纯 度 检 测 技 术 规 程SSR 分子标记法

DB13/T 5112-2019 是河北省地方标准，规定了利用SSR分子标记技术检测棉花杂交种真实性与纯度的方法。以下为关键条款的详细解读：

该标准适用于杂交棉品种的真实性检验以及杂交棉制种田纯度的田间检验和室内分子鉴定。

标准中提到的SSR标记需具备以下特性：多态性高、重复性好、扩增稳定。实验室应使用经验证的引物对，确保检测结果准确可靠。

样品采集要求：真实性检验需采集待测样品至少30株；纯度检验则需从制种田随机抽取不少于500株植株。每株取叶片组织约0.2克保存于无菌滤纸上。

DNA提取采用CTAB法或其他适宜方法，确保DNA浓度达到50ng/μL以上，纯度A260/A280值在1.8~2.0之间。

PCR反应体系包括模板DNA、特异性引物、dNTPs、Taq酶等成分。扩增程序通常设置初始变性94℃ 5min；随后35个循环：94℃ 30s，引物退火温度（依据引物而定）30s，72℃延伸30s；最后72℃延伸5min。

电泳检测采用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶或3%琼脂糖凝胶。观察到清晰可辨的带型后，通过与对照样本比对判断是否符合预期模式。

真实性判定依据是待测样本与标准品种之间是否存在显著差异。若所有检测位点均一致，则认为是同一品种；否则判定为不同品种。

纯度计算公式为P=（N-n）/N×100%，其中N为总检测株数，n为与目标品种不一致的株数。当纯度≥98%时判定为合格。

此外还规定了质量控制措施，如设立阳性对照、阴性对照及重复实验等，以保证检测结果的可靠性。