DB22T 3089-2019 羊传染性脓疱病毒检测 荧光PCR探针法

DB22/T 3089-2019是吉林省地方标准，规定了羊传染性脓疱病毒检测的荧光PCR探针法。以下是对标准中重要条文的详细解读：

范围

本标准适用于羊传染性脓疱病毒的检测，采用荧光PCR探针法。此方法通过特异性引物和探针扩增病毒基因片段，具有高灵敏度和特异性。

规范性引用文件

引用了GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法，确保实验用水的质量符合要求。这一步骤对于保证实验结果的准确性至关重要。

术语和定义

明确界定了“羊传染性脓疱病毒”和“荧光PCR探针法”的概念。其中，“羊传染性脓疱病毒”是一种能引起羊口唇等部位病变的病毒；“荧光PCR探针法”则是利用荧光信号实时监测PCR扩增过程的技术。

试剂与材料

规定了所需试剂包括DNA提取试剂盒、荧光定量PCR试剂盒、阳性对照品、阴性对照品以及无核酸酶水。这些试剂的选择直接影响到检测结果的真实性。

仪器设备

列出了必需的仪器如荧光定量PCR仪、微量移液器、离心机、恒温金属浴等。每种仪器都有其特定的功能，在整个检测过程中扮演着不可或缺的角色。

样品采集与保存

强调了样品采集应遵循无菌操作原则，并尽快送检或置于-70℃条件下长期保存。这样可以最大限度地保持样本的完整性，避免因储存不当导致的结果偏差。

核酸提取

描述了具体的核酸提取步骤，包括加入裂解液后室温静置5分钟，再经过离心分离得到上清液。这个过程需要严格控制时间和温度参数以获得高质量的核酸样本。

荧光PCR反应体系建立

给出了反应体系的具体组成成分及其体积比例，例如使用10×PCR缓冲液、dNTP混合物、MgCl₂溶液等。同时指出了反应总体积通常为20μL左右。

荧光PCR扩增条件

提供了详细的扩增程序，包括预变性阶段设置为95℃持续5分钟，随后进行40个循环的变性（95℃）、退火（55℃）及延伸（72℃）。每个阶段的时间设置都经过科学验证，能够有效促进目标序列的特异性扩增。

结果判断

明确了判定标准：当Ct值小于或等于35时视为阳性；若Ct值大于35且小于40，则需重复实验；而Ct值超过40则判定为阴性。此外还提到如果出现非特异性扩增曲线，则整个实验无效。

以上就是对DB22/T 3089-2019标准中关键部分的深入解析，希望对你有所帮助。