DB50T 953-2019 饲料中大肠杆菌0157的快速检测 环介导等温扩增（LAMP）法

DB50/T 953-2019《饲料中大肠杆菌O157的快速检测 环介导等温扩增（LAMP）法》是一项地方标准，规定了利用环介导等温扩增技术快速检测饲料中大肠杆菌O157的方法。以下是对该标准中一些重要条文的详细解读：

范围

本标准适用于饲料及其原料中大肠杆菌O157的快速检测。这一范围明确了标准的应用领域，确保其在饲料行业中的适用性。

规范性引用文件

标准中引用了GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法、SN/T 1876 进出口动物源食品中大肠杆菌O157:H7检测方法等文件。这些引用文件为本标准提供了必要的技术支持和参考依据。

术语和定义

- 环介导等温扩增（LAMP）：一种基于特异性引物与模板DNA在恒温条件下进行高效扩增的技术。这项技术的关键在于通过设计特定的引物来识别目标基因序列的不同区域，从而实现高特异性的扩增。

- 大肠杆菌O157：一种具有致病性的大肠杆菌菌株，能够产生志贺毒素，对人类健康构成威胁。饲料中可能存在这种细菌，因此需要进行监测。

技术要求

- 样品采集与处理：样品应随机抽取，确保代表性。样品处理需遵循无菌操作规程，避免污染。

- 试剂准备：所有试剂应在有效期内使用，并按照说明书正确配制。特别注意缓冲液、酶和引物的浓度，以保证实验结果的准确性。

- 反应体系建立：LAMP反应体系包括模板DNA、特异性引物、Bst DNA聚合酶、反应缓冲液等成分。每个成分的用量都有严格的规定，例如引物浓度通常为0.2 μM。

操作步骤

1. DNA提取：采用适宜的核酸提取方法从样品中提取总DNA，确保DNA纯度和完整性。

2. 反应设置：将提取的DNA加入到预先配置好的LAMP反应混合物中，混匀后置于63℃水浴锅中保温60分钟。

3. 结果判断：反应结束后，通过肉眼观察或荧光检测仪读取结果。如果出现明显的颜色变化或者荧光信号，则判定为阳性。

结果分析

- 阳性判断：当检测到目标基因片段的存在时，即可判定为阳性。

- 阴性判断：未检测到任何信号时，则判定为阴性。

- 对照实验：设立阳性和阴性对照，以验证实验的有效性。

注意事项

- 实验过程中要严格遵守无菌操作原则，防止外部污染。

- 定期校准仪器设备，确保测量数据准确可靠。

- 对于不确定的结果，建议重复实验或采用其他检测方法进一步确认。

以上是对DB50/T 953-2019标准中关键部分的深入解析，旨在帮助相关人员更好地理解和应用此标准。