DB43T 1671-2019 动物疫病病毒核酸提取 磁珠法

DB43/T 1671-2019《动物疫病病毒核酸提取 磁珠法》是一项湖南省地方标准，旨在规范磁珠法提取动物疫病病毒核酸的操作流程。以下是对该标准中一些关键条款的详细解读：

样品采集与保存

标准指出样品应采用无菌容器采集，并立即置于冰上或低温环境下运输至实验室。若不能及时检测，样品需在-70℃以下长期保存。这一要求确保了样品的生物活性和完整性，避免因温度波动导致病毒核酸降解。

核酸提取步骤

1. 裂解：使用适当的裂解液处理样品，使病毒颗粒破裂释放出核酸。此过程需严格控制温度和时间，以保证高效裂解。

2. 磁珠结合：向裂解后的样品中加入磁珠，磁珠表面修饰有特定的核酸结合基团。通过搅拌使磁珠充分接触并吸附核酸分子。

3. 洗涤：利用磁场分离磁珠-核酸复合物，并用洗涤缓冲液清洗去除杂质。此步骤需重复多次，确保纯度。

4. 洗脱：将核酸从磁珠上洗脱下来，通常使用低盐、高温的洗脱液。洗脱液的选择直接影响后续实验的质量。

质量控制

标准强调在整个提取过程中必须设置阳性对照、阴性对照及空白对照。阳性对照用于验证试剂的有效性；阴性对照监测污染情况；空白对照则用来确认实验环境的洁净程度。

安全措施

鉴于操作涉及病原微生物，标准要求所有人员穿戴防护装备，包括手套、口罩、防护服等，并在生物安全柜内完成高风险操作环节。废弃物需按照相关规定妥善处理。

以上内容基于DB43/T 1671-2019的核心要点进行了概括性阐述，实际应用时还需结合具体实验条件灵活调整参数设置。