DB65T 4091-2018 LAMB1基因rs159769941 SNP位点辅助评定细毛羊羊毛自然长度的分子检测

DB65/T 4091-2018标准规定了利用LAMB1基因rs159769941 SNP位点对细毛羊羊毛自然长度进行分子检测的方法。以下为关键内容解析：

1. 适用范围：本标准适用于以新疆细毛羊为主的细毛羊品种，用于评估羊毛自然长度的分子遗传标记检测。

2. 检测原理：基于PCR扩增技术，通过特异性引物扩增目标区域，然后利用限制性内切酶消化或高分辨率熔解曲线分析等方法检测SNP位点。

3. 样品采集与保存：从耳组织、血液或毛囊中提取DNA，确保样品新鲜并及时处理。

4. DNA提取：采用适合羊类动物的商业化试剂盒，按照说明书操作，保证DNA纯度和浓度达到实验要求。

5. PCR扩增体系与反应条件：推荐使用25μL体系，包含上下游引物各0.2μM，模板DNA适量。反应条件通常包括预变性94℃ 5分钟；30个循环：94℃ 30秒，退火温度（根据引物设计）30秒，72℃ 30秒；最后延伸72℃ 10分钟。

6. 结果判定：

- 对于限制性内切酶法：酶切后通过琼脂糖凝胶电泳观察条带模式，A/A型显示一条条带，A/G型显示两条不同大小的条带，G/G型显示另一条条带。

- 高分辨率熔解曲线法：根据熔解曲线特征判断基因型。

7. 质量控制：设置阳性对照、阴性对照及空白对照，确保检测结果准确可靠。

8. 数据分析：记录每个样本的基因型，统计群体中不同基因型频率，并与表型数据关联分析。

9. 注意事项：操作人员需经过培训，严格按照规程执行；试剂使用前应确认有效期内；实验废弃物按相关规定妥善处理。

此标准为育种单位和个人提供了科学依据和技术支持，有助于加快优质细毛羊品种选育进程。