DB35T 1852-2019 猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法

福建省地方标准《猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法》（DB35/T 1852-2019）规定了使用实时荧光RT-PCR技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的方法。以下为标准中的关键内容及其详细解读：

样品采集与保存

标准指出，样品应从疑似感染的猪只采集，包括血液、肺组织等。样品应在-70℃条件下长期保存，短期可置于-20℃。这一要求确保了样品在检测前的活性和完整性，避免因不当保存导致检测结果不准确。

实验室条件

实验室需具备生物安全二级及以上条件，并配备实时荧光RT-PCR仪及相关试剂。实验人员需经过专业培训并持有相应资格证书。此规定旨在保障实验操作的安全性和准确性，防止交叉污染及误操作。

检测步骤

1. RNA提取：使用商业化RNA提取试剂盒按照说明书操作，提取样本中的RNA。

2. RT-PCR反应体系配置：将提取的RNA加入预混好的RT-PCR反应液中，其中包括特异性引物、探针以及酶类物质。

3. 扩增程序：设定合适的退火温度和循环次数，通常为两步法或三步法循环扩增。

4. 数据分析：通过仪器软件分析扩增曲线，判断是否存在目标基因片段。

结果判定

当Ct值小于等于35时判定为阳性；若Ct值大于35且小于40，则需重复实验确认；若仍大于35则判定为可疑；超过40则判定为阴性。这一标准明确了结果判断的具体数值范围，有助于统一检测结论。

注意事项

实验过程中要严格遵守无菌操作规程，防止外部污染；同时注意废弃物处理，避免环境污染。此外，在实际应用中还需结合临床症状和其他检测手段综合判断病情。

以上是对DB35/T 1852-2019标准中重要条文的详细解读，希望对从事相关工作的技术人员有所帮助。