DB34T 2905-2017 辣椒疫霉菌检测鉴定方法

摘要：本文件规定了辣椒疫霉菌的检测和鉴定方法，包括样品采集、处理、分离培养、形态学鉴定及分子生物学鉴定等内容。本文件适用于辣椒疫霉菌的实验室检测与田间诊断。
Title：Detection and Identification Method of Phytophthora capsici in Chili Pepper
中国标准分类号：B 61
国际标准分类号：65.020

DB34/T 2905-2017《辣椒疫霉菌检测鉴定方法》是安徽省地方标准，规定了利用分子生物学和形态学手段对辣椒疫霉菌进行检测与鉴定的技术要求。以下为该标准的重要条文及解读：

1. 样品采集：标准指出需从疑似发病植株的根部、茎基部或果实病斑处采集样品。这一要求确保了能够获取到含有病原体的典型部位，提高检测准确性。

2. 样品处理：样品应置于无菌条件下保存并尽快送检。若不能及时检测，则需将样品置于-20℃冷冻保存不超过三个月。此规定旨在防止样品在运输和储存过程中受到污染或降解影响检测结果。

3. 直接镜检：取少量病变组织置于载玻片上滴加一滴无菌水后覆以盖玻片，在显微镜下观察菌丝形态特征。辣椒疫霉菌菌丝呈无隔膜状且分支角度较大。这种方法快速直观但需要操作者具备一定经验才能准确判断。

4. PCR扩增：使用特异性引物对样本DNA进行PCR扩增，并通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。标准中提供了引物序列及其预期大小约为600bp左右。这一步骤利用了分子生物学技术提高了检测灵敏度和特异性。

5. 结果判定：当出现符合预期大小的特异性条带时即可判定为阳性；否则为阴性。同时强调实验过程中必须设置阳性对照和阴性对照以保证结果可靠性。此外还建议重复试验至少两次来验证结果的一致性。

6. 注意事项：在整个操作流程中要严格遵守无菌操作规程避免外界污染干扰检测结果；另外对于不确定的中间状态样品可以结合其他检测方法综合分析最终确定诊断结论。

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