DB37T 3625-2019 牛羊养殖场气溶胶布鲁氏菌荧光定量PCR鉴别检测技术规程

DB37/T 3625-2019《牛羊养殖场气溶胶布鲁氏菌荧光定量PCR鉴别检测技术规程》是一项山东省地方标准，旨在规范牛羊养殖场中气溶胶布鲁氏菌的检测方法。这项标准特别适用于通过荧光定量PCR技术对牛羊养殖场环境中的气溶胶样本进行布鲁氏菌的快速、准确检测。以下将从几个关键部分对该标准进行解读。

样品采集与处理

标准要求样品应在无菌条件下采集，通常使用空气采样器收集气溶胶样品。样品采集点应选择在牛羊舍内可能污染区域如通风口、饲料储存区等，并且要确保采样时间足够长以获得足够的微生物量。采集后的样品需立即置于低温环境中保存并尽快送至实验室分析。

实验室操作

在实验室阶段，首先需要对样品进行预处理，包括但不限于过滤、浓缩等步骤来提高目标病原体浓度。接着按照试剂盒说明书进行核酸提取工作，这是整个检测流程中最关键也是最容易出现问题的一个环节。只有高质量的DNA/RNA提取才能保证后续扩增反应的有效性。

扩增条件设置

荧光定量PCR反应体系的设计至关重要。标准给出了推荐使用的引物和探针序列，以及最佳退火温度范围。此外还规定了每个循环的具体参数（如变性时间、退火时间和延伸时间），这些都需要严格遵守以确保结果可靠。

结果判断

根据Ct值大小来判定是否存在布鲁氏菌感染。一般而言，当Ct≤35时视为阳性；若Ct>40则认为阴性；介于两者之间的样本需重复实验或采用其他手段进一步确认。同时强调了空白对照组的重要性，用于排除非特异性扩增现象。

注意事项

最后，标准还特别提醒实验人员要注意个人防护措施，避免因操作不当而导致职业暴露风险增加。此外，在日常工作中还需定期校准仪器设备，保证测量精度符合要求。

综上所述，《牛羊养殖场气溶胶布鲁氏菌荧光定量PCR鉴别检测技术规程》为相关行业提供了一套科学严谨的操作指南，有助于提升检测效率及准确性，对于保障畜牧业健康发展具有重要意义。