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资源简介
摘要：本文件规定了猪伪狂犬病病毒gE基因的PCR检测方法，包括样品采集、核酸提取、PCR扩增及结果判定等内容。本文件适用于猪伪狂犬病病毒gE基因的检测与诊断。
Title：Detection technology of gE gene of porcine pseudorabies virus by PCR
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：11.220 -
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拓展解读
DB37/T 3087-2017《猪伪狂犬病病毒gE基因PCR检测技术》是山东省地方标准，规定了猪伪狂犬病病毒gE基因PCR检测的技术要求。以下对部分关键条款进行详细解读：
5.1 样品采集与保存：样品应包括猪的鼻拭子、眼拭子、口咽拭子等。采集后立即放入含有保存液的无菌采样管中，在4℃条件下保存不超过72小时，或在-70℃长期保存。
解读：这一条款明确了样本类型和保存条件。鼻拭子、眼拭子等能更准确反映上呼吸道感染情况。及时低温保存可防止核酸降解，确保检测准确性。
5.2 核酸提取：使用商品化DNA提取试剂盒，按照说明书操作提取样品中的DNA。
解读：选择高质量的DNA提取试剂盒是保证检测灵敏度和特异性的基础。严格按说明书操作可以减少人为误差。
5.3 PCR反应体系：25μL体系包含12.5μL Premix Taq酶、引物各0.5μL、模板DNA 2μL，补足至25μL。
解读：该体系配置合理，Premix Taq酶包含热启动酶，能有效避免非特异性扩增。引物浓度适中，既能保证特异性又能提高扩增效率。
5.4 扩增程序：94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸30秒，共40个循环；最后72℃延伸5分钟。
解读：此扩增程序经过优化，能够高效扩增目标片段。40个循环既保证了灵敏度又避免了过度扩增导致的假阳性。
6 结果判定：以阴性对照无扩增产物、阳性对照有扩增产物为合格。样品Ct值≤35为阳性，Ct值>35且<40为可疑，需重复实验。
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最后更新时间 2025-06-03
