DB37T 3317-2018 鸡白血病多重PCR和斑点杂交检测方法

摘要：本文件规定了鸡白血病多重PCR和斑点杂交检测方法的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、操作步骤、结果判定及注意事项。本文件适用于鸡白血病病毒的检测与诊断。
Title：Multiple PCR and Dot Hybridization Detection Method for Avian Leukosis
中国标准分类号：B 46
国际标准分类号：11.220

DB37/T 3317-2018《鸡白血病多重PCR和斑点杂交检测方法》是山东省地方标准，适用于鸡白血病病毒（ALV）的检测。以下是对该标准中关键条款的解读。

在标准的范围部分明确指出，本标准规定了使用多重PCR与斑点杂交技术联合检测鸡白血病病毒的方法。这一方法可以用于鸡群中鸡白血病病毒的筛查、诊断以及流行病学调查。

样品采集部分强调，应从疑似感染鸡只的血液或组织样本中采集，确保样本的新鲜度和代表性。同时要求采集工具需无菌且一次性使用，以避免污染。

对于试剂准备，标准要求所有试剂均需按照说明书配制，并在使用前进行质量检查。特别注意引物的设计应具有高度特异性，能够区分不同亚型的鸡白血病病毒。

在多重PCR扩增环节，标准规定了反应体系的组成及反应条件。例如，退火温度通常设定为55℃至60℃之间，延伸时间为30秒至1分钟。每个循环的次数一般为30到40次。

斑点杂交步骤则详细描述了如何制备探针，将探针固定于固相载体上，以及如何进行显色反应来判断结果。其中，探针的选择同样需要具备高特异性和灵敏度。

结果分析部分提醒操作人员要仔细观察结果，阳性对照呈现清晰信号表明实验有效，而阴性对照不应有任何非特异性信号出现。

此外，标准还提出了实验记录的要求，包括但不限于样本信息、试剂批号、仪器参数等，以便追溯和验证实验过程。

最后，标准强调了实验室安全措施，如废弃物处理、个人防护装备佩戴等，确保实验人员健康不受威胁。

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