DB37T 3320-2018 水貂、狐和貉常见细菌实时荧光PCR检测方法

摘要：本文件规定了水貂、狐和貉常见细菌实时荧光PCR检测方法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品处理、核酸提取、PCR扩增、结果分析及报告等内容。本文件适用于水貂、狐和貉常见细菌的快速检测与鉴定。
Title：Detection Method of Common Bacteria in Mink, Fox and Raccoon by Real-time Fluorescent PCR
中国标准分类号：B46
国际标准分类号：07.100.30

DB37/T 3320-2018《水貂狐貉常见细菌实时荧光PCR检测方法》是一项山东省地方标准，规定了使用实时荧光PCR技术对水貂、狐和貉这三种经济动物中常见的细菌进行检测的方法。以下是对该标准中一些关键条款的详细解读。

### 范围

本标准适用于水貂、狐和貉体内常见病原菌如大肠杆菌、沙门氏菌等的检测。通过此方法可以快速准确地识别这些细菌的存在与否，为养殖业提供科学依据。

### 规范性引用文件

标准引用了多个国内外相关文献和技术规范，确保检测过程的专业性和准确性。例如，GB/T 6682规定了实验室用水的质量要求；SN/T 1193提供了关于微生物学检验的基本原则。

### 术语和定义

- 实时荧光PCR：一种利用荧光信号变化来监测扩增产物量的技术。

- 阳性对照：用于验证试剂盒有效性的样本。

- 阴性对照：用来排除实验过程中污染的可能性。

### 技术要求

#### 样品采集与保存

样品应从健康或疑似患病的动物身上采集，并立即置于特定条件下保存以防止DNA降解。通常情况下，血液、组织液或其他体液均可作为检测样本。

#### PCR反应体系建立

包括但不限于引物设计、探针选择以及反应条件优化等内容。其中引物的设计需考虑特异性与灵敏度之间的平衡；而探针则需具备良好的稳定性和较低的成本。

#### 结果分析

通过对扩增曲线及Ct值（循环阈值）的分析来判断目标基因是否被成功扩增。如果Ct值小于设定阈值，则认为样品呈阳性；反之则为阴性。

### 检测步骤

1. 样品准备：按照标准要求正确采集并处理样本。

2. 提取核酸：采用适当的试剂盒提取样本中的DNA/RNA。

3. 设置反应体系：根据试剂说明书配置好所需的PCR反应混合物。

4. 运行PCR程序：将配置好的反应体系放入仪器中运行预设好的程序。

5. 数据记录与解释：观察仪器输出的数据并作出相应的结论。

### 注意事项

- 在整个操作过程中必须严格遵守无菌操作规程，避免外界因素干扰结果。

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