DB37T 3129.1-2018 鸭细小病毒感染诊断技术 第1部分：病毒分离鉴定

DB37/T 3129.1-2018《鸭细小病毒感染诊断技术 第1部分：病毒分离鉴定》是一项山东省地方标准，为鸭细小病毒病的实验室诊断提供了规范化的操作指南。以下将从标准中的关键内容出发，对重要条文进行详细解读。

标准适用范围

该标准适用于鸭细小病毒（Duck Parvovirus）感染的诊断，尤其是通过病毒分离与鉴定的方法来确认是否存在病毒感染。这一部分主要关注的是病毒学检测手段，而非血清学或分子生物学方法。

病毒分离的基本要求

1. 样品采集

样品应取自发病初期或急性期的鸭子，包括脑组织、肝脏、脾脏等器官。样品需保持新鲜，并尽快送至实验室处理以保证病毒活性。

2. 细胞培养系统的选择

使用敏感性高的细胞系如鸭胚成纤维细胞（DEF）作为宿主细胞。这些细胞能够支持鸭细小病毒的有效复制，从而提高分离效率。

3. 接种及孵育条件

将采集到的新鲜样品匀浆后直接接种于已准备好的细胞培养瓶中，在37℃条件下培养观察。通常在48小时左右开始出现细胞病变效应（CPE），表现为细胞圆缩、脱落等现象。

病毒鉴定方法

1. 形态学观察

利用电子显微镜检查培养物中是否有典型的细小病毒颗粒，其直径约为20nm左右，呈二十面体对称结构。

2. 免疫荧光试验（IFA）

使用特异性抗鸭细小病毒抗体标记培养物中的病毒抗原。阳性结果表现为绿色荧光斑点分布于细胞内或表面。

3. PCR检测

提取培养物DNA后采用特异性引物扩增病毒基因片段，通过琼脂糖凝胶电泳分析产物大小是否符合预期值来验证病毒存在。

注意事项

- 在整个操作过程中必须严格遵守无菌操作规程，防止污染。

- 不同批次实验间应设立阴性和阳性对照组以确保结果准确可靠。

- 实验废弃物需按照生物安全规定妥善处置，避免造成环境污染。

以上是对DB37/T 3129.1-2018标准中关于鸭细小病毒感染诊断技术部分内容的重点解析。此标准对于保障养鸭业健康发展具有重要意义，同时也为相关科研工作者提供了权威参考依据。