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摘要:本文件规定了鹿粘膜病双抗夹心ELISA检测方法的原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、操作步骤、结果判定及注意事项。本文件适用于鹿粘膜病病毒抗原的检测。
Title:Detection method of dual-antibody sandwich ELISA for mucosal disease in deer
中国标准分类号:B46
国际标准分类号:11.100
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拓展解读
DB22/T 2984-2019《鹿粘膜病双抗夹心ELISA检测方法》是一项地方标准,规定了使用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法检测鹿粘膜病病毒抗原的程序。以下是对该标准中一些关键条款的深入解读:
1. 适用范围:本标准适用于鹿粘膜病病毒抗原的检测。这意味着该方法可以用于确认鹿是否感染了鹿粘膜病病毒,为疾病防控提供科学依据。
2. 试剂与材料:标准要求使用的试剂需符合相关国家标准或行业标准,并且所有试剂在使用前都应检查其有效期和质量。例如,酶标板、抗体等关键试剂的选择直接影响检测结果的准确性。
3. 样品采集与处理:样品采集应在无菌条件下进行,确保样本的新鲜度和代表性。对于鼻腔拭子或分泌物,需要按照规定的方法收集并妥善保存,以防止污染和降解。
4. 检测步骤:
- 样品准备:将采集到的样本进行适当的稀释或浓缩处理。
- 包被抗体孵育:将包被有特异性抗体的酶标板与待测样品一起孵育,使抗原抗体结合。
- 洗涤:通过多次洗涤去除未结合的物质。
- 加入酶标二抗:加入带有酶标记的第二抗体,形成“夹心”结构。
- 显色反应:加入底物溶液后发生颜色变化,颜色深浅反映抗原含量高低。
- 测定OD值:利用分光光度计测量吸光度值(OD),并与标准曲线比较得出结果。
5. 结果判定:根据标准提供的临界值来判断样品是否阳性。如果测得的OD值大于等于临界值,则判定为阳性;反之则为阴性。
6. 质量控制:每次实验都必须设立阴性和阳性对照组,确保实验过程中的稳定性和可靠性。此外,还需定期对仪器设备进行校准维护,保证数据准确可靠。
7. 注意事项:操作人员需经过专业培训,严格按照规程执行;避免交叉污染;注意个人防护措施;废弃物按相关规定妥善处置。
以上是对DB22/T 2984-2019《鹿粘膜病双抗夹心ELISA检测方法》部分重要内容的解读。这项标准不仅提供了具体的操作指南,还强调了实验过程中各个环节的质量控制要点,有助于提高检测结果的真实性和准确性。