GBT 34796-2017 水溶液中核酸的浓度和纯度检测 紫外分光光度法

GBT 34796-2017 核酸浓度和纯度检测常见问题解答

什么是 GBT 34796-2017？

GBT 34796-2017 是中国国家标准，规定了通过紫外分光光度法检测水溶液中核酸浓度和纯度的方法。该标准适用于生物医学研究、分子生物学实验等领域。

为什么选择紫外分光光度法检测核酸浓度和纯度？

紫外分光光度法具有操作简单、快速、灵敏度高的特点，能够有效测定核酸在特定波长下的吸光值，从而计算其浓度和纯度。

核酸检测的标准波长是多少？

核酸的吸收峰通常位于 260 nm 和 280 nm。其中，260 nm 波长用于测量核酸浓度，而 280 nm 波长则用于评估核酸纯度。

如何计算核酸浓度？

• 核酸浓度 = (A260 × 稀释倍数) ÷ 吸光系数
• 吸光系数通常为 50 μg/mL（DNA）或 40 μg/mL（RNA）。

如何判断核酸的纯度？

• 通过 A260/A280 比值判断 DNA 的纯度：
• 理想值为 1.8（纯净 DNA）。
• 低于 1.8 可能含有蛋白质污染。
• 高于 1.8 可能含有 RNA 污染。
• 对于 RNA，A260/A230 比值用于评估其他有机污染物的存在。

检测时需要注意哪些事项？

• 样品需稀释至适当的浓度范围（一般为 0.1-1.0 A260 单位）。
• 避免样品中含有强吸收物质（如蛋白质、酚类化合物等）。
• 使用洁净的比色皿或石英比色池以减少误差。
• 仪器需定期校准并使用匹配的空白对照。

如果 A260/A280 比值异常，该如何处理？

• 若比值偏低，可能含有蛋白质污染，可尝试用酚/氯仿抽提去除。
• 若比值偏高，可能含有 RNA 污染，可使用 DNase 处理。
• 若仍无法解决，建议重新提取核酸。

紫外分光光度法是否适用于所有类型的核酸？

是的，该方法适用于 DNA 和 RNA 的浓度及纯度检测，但需要根据不同的核酸类型调整参考吸光系数。

如何验证检测结果的准确性？

• 重复检测以确认数据一致性。
• 使用琼脂糖凝胶电泳验证核酸完整性。
• 与其他定量方法（如荧光定量法）进行对比验证。

GBT 34796-2017 是否有国际通用性？

虽然该标准是中国国家标准，但其原理与国际通用方法一致，因此在国际上也具有一定的参考价值。